Лабораторный практикум по общей микробиологии. Прунтова О.В - 47 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

Необходимо помнить, что статистическая обработка результатов
возможна только при минимальной технической ошибке.
3. Определение количества клеток и биомассы
нефелометрическим методом
В основе метода лежит измерение уменьшения количества света при
его прохождении через суспензию клеток. В определенных пределах оно и
пропорционально концентрации клеток и обусловлено преимущественно
рассеянием света клетками. Величина этого показателя зависит от многих
факторов (формы и размеров клеток, оптических свойств культуральной
среды, длины волны падающего света и т.д.). Поэтому нефелометрический
метод пригоден лишь для тех микроорганизмов, рост которых вызывает
помутнение среды и не сопровождается заметным изменением формы и
размеров клеток, образованием мицелия, пленок или других скоплений.
Питательная среда, в которой предполагается определять число клеток,
должна быть оптически прозрачной. Изменение интенсивности света при
прохождении через суспензию клеток измеряют с помощью фотоэлектро-
колориметра (ФЭК) или спектрофотометра, выбирая длину волны (обычно
в интервале 540 - 650 нм), при которой поглощение света данной суспен-
зией клеток является минимальным.
4. Стандарты мутности и их применение
В ряде случаев количество клеток в суспензии бывает достаточно
определить визуально путем сравнения со стандартом мутности. Стандар-
ты мутности, выпускаемые государственным НИИ стандартизации и кон-
троля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича,
представляют собой взвесь частиц стекла пирекс в дистиллированной воде.
За единицу стандарта мутности общего назначения условно принята мут-
ность суспензии в физиологическом растворе бактерий - возбудителей ти-
фа с концентрацией клеток 100 млн/мл. Стандарт мутности включает 4
эталона на 10, 11, 9 и 5 единиц, что соответствует содержанию 1-10 ;
1,1-Ю
9
; 0,9-10
9
и 0,5-Ю
9
клеток в 1 мл взвеси. Для определения количества
клеток пробирку с исследуемой суспензией ставят рядом с эталоном 10 и
рассматривают их в отраженном и проходящем свете на фоне белого листа
бумаги, в центре которого нанесено несколько черных линий.
47