Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов. Сайфитдинова А.Ф. - 13 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СПбГУ | Санкт-Петербург

Составители: 

Рубрика: 

Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов 10
4. Высушить препараты на воздухе (сухие препараты можно хранить
замороженными в темной коробочке).
5. Заключить препарат в подкисленную воду и исследовать под
микроскопом.
Протокол 2.2.4. Q-бэндинг митотических хромосом с акрихин ипритом
Приготовить краситель:
1. 2 г NaCl растворить в 100 мл буфера Макильвейна (pH 6,8-7,0).
2. 5 мл акрихин иприта (Quinacrine mustard, Sigma) растереть в 1 мл
дистиллированной воды до полного исчезновения комочков.
3. Влить воду с красителем в буфер и ополоснуть ступку буфером, важно
убедиться в полном растворении красителя.
4. Хранить при 8
о
С в темноте.
Окраска:
1. Сухие препараты сполоснуть буфером Макильвейна, pH 6,8-7,0.
2. Поместить стекла в краску и оставить на 20-60 мин при 8
о
С в темноте.
3. Промыть в буфере Макильвейна pH 6,8-7,0 в течение 2-8 мин.
4. Заключить в фотозащитную среду и исследовать под микроскопом.
Отмыть краситель:
1. Удалить покровное стекло.
2. Промыть препарат в воде 1-2- мин.
3. Поместить в смесь: 96% этанол–ЛУК-вода (1:1:1) на 10-15 мин.
Некоторые антибиотики также обладают способностью нуклеотид-
специфично связываться с ДНК. При этом хромомицин А3 и оливомицин в
ответ на облучение синим светом излучают желто-зеленый свет. Эти свойства
используются в получении дифференциальной окраски митотических хромосом
в том случае, когда необходимо выявить R-бэнды (эти вещества окрашивают
GC-обогащенную ДНК) (Протокол 2.2.5). Иногда для
получения более четкого
результата используется контрастирование другим антибиотиком –
дистамицином А, который специфически связывается с АТ-парами, поглощает
свет, но не обладает способностью флуоресцировать (Протокол 2.2.6).
Протокол 2.2.5. Дифференциальная окраска хромосом хромомицином А3
Концентрированный раствор: 0,5 мг/мл водный раствор хромомицина А3
оставить на 1 неделю при 4
о
С в темноте для созревания.
Рабочий раствор: к концентрированному раствору красителя добавить равный
объем буфера Макильвейна pH 7,0 и добавить MgCl
2
до 5 мM.
1. Нанести рабочий раствор красителя на препарат и окрашивать 30-45 мин
при комнатной температуре или в течение ночи при 4
о
С
2. Сполоснуть буфером Макильвейна pH 7,0
3. Заключить препарат в фотозащитную среду и оставить в темной
коробочке при 4
о
С.
4. Исследовать препарат под микроскопом не раньше следующего дня.

Страницы