Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 19 стр.

       50 мкл экстракта,
       20 мкл 0,4% раствора НАДФН.
       Прямо перед измерением в экспериментальную кювету добавить 20 мкл
3% раствора окисленного глутатиона и измерять ежесекундно в течение
3,5 мин при длине волны 340 нм.
                                         Расчёты
       Расчет активности глутатионредуктазы в ммоль в мин на один грамм
сухого веса проводится по формуле:
             А = (((Е1–Е2)/(T/60))•Vраствора в кювете•Vэкстракта•Х)/(6,22•m•Δm),
или ммоль в мин на 1 мг белка по формуле:
                       А = (((Е1–Е2)/(T/60)) Vраствора в кювете•Х)/(6,22•С),
где:
А – активность фермента в ммоль мин-1мг-1 белка (или сухого веса),
Е1 – оптическая плотность в начальный момент времени,
Е2 – оптическая плотность в конечный момент времени,
Х – разведение,
Т – время реакции, с,
Vраствора в кювете – объём раствора в кювете, мл,
Vэкстракта – общий объём пробы, мл,
m – масса навески, г,
Δm – отношение сухого веса к сырому (см. гл. 5.1.),
6,22 – коэффициент экстинкции для глутатиона, см-1мМ-1.
       Измерение активности фермента проводят в нескольких (не менее трёх)
биологических      и     аналитических       повторностях.      Стандартную    ошибку
вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).




                                                19