Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 21 стр.

достать пробы из бани.
       В контрольный вариант добавить 0,2 мл ТХУ и 0,07 мл ГПТБ.
       В опытный вариант добавить только 0,07 мл ГПТБ. Быстро поместить
пробы обратно на водяную баню и инкубировать при 37 °С. Через 5 мин
строго по секундомеру(!) реакцию остановить добавлением 0,2 мл 20%
раствора ТХУ в опытную пробирку.
       Все пробы центрифугировать 7 мин при 12 500 g.
       Далее в полученных пробах определяли содержание GSH (см. методику
определения содержания глутатиона).
                                    Расчёты
       Расчет активности глутатионпероксидазы в ммоль в мин на один мг
белка проводится по формуле:
                          А = ((ΔК/T)•X1•Х2)/(13,6•С•L),
где:
А – активность фермента в ммоль мин-1мг-1 белка,
ΔК – разность оптической плотности контроля и опыта,
Т – время реакции, мин,
Х1 – разведение образца, добавляемого в реакцию (общий объём реакционной
       смеси разделить на количество образца),
Х2 – разведение образца, взятого для определения количества GSH,
13,6 – коэффициент экстинкции окрашенного аниона, образующегося при
       взаимодействии GSH с ДТНБК при 340 нм, мМ-1см-1,
С – содержание белка в пробе, мг,
L – длина оптического пути, см.
       Измерение активности фермента проводят в нескольких (не менее трёх)
биологических     и   аналитических     повторностях.      Стандартную   ошибку
вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).




                                          21