Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 23 стр.

спектрофотометрически при длине волны 340 нм (максимум поглощения
глутатион-S-ХДНБ) при t = 25 °C ежесекундно в течение 1,5 минут.
                                      Расчёты
        Активность фермента рассчитывают, используя коэффициент экстинкции
для ГS-ХДНБ при длине волны 340 нм, равный 9,6 мМ-1·см-1, и выражают в
ммоль образующихся глутатион S-конъюгатов в минуту на мг белка или г сух
веса.
        Расчет активности глутатион-S-трансферазы в ммоль в мин на один мг
белка проводится по формуле:
                      A = ((ΔD/T)•Vреакц.смеси•Х)/(e•Vпроб•С•L),
где:
А – активность фермента, ммоль мин-1мг-1 белка,
D – изменение оптической плотности (разность оптической плотности в
        начальный и конечный момент времени),
T – время реакции, мин,
Х – разведение используемого объёма вытяжки в реакционной смеси,
е – коэффициент молярной экстинкции при 340 нм (9,6 мМ-1см-1),
С – содержание белка в пробе, мг,
Vпробы – объём пробы, используемый для определения активности GST, мл,
Vреакц.смеси – объём реакционной смеси в кювете, мл,
L – длина оптического пути, см (в нашем случае L=1 см).
        Измерение активности фермента проводят в нескольких (не менее трёх)
биологических     и    аналитических      повторностях.     Стандартную   ошибку
вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).




                                            23