Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 24 стр.

   2. ВЫЯВЛЕНИЕ ИЗОФОРМ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ
                      2.1. Подготовка и заливка гелей
                          Необходимые реактивы:
Важно: все растворы для электрофореза готовят на деионизированной воде
  mQ.
1) 1,5 М буфер для нижнего (разделяющего) геля, рН 8,8-8,9 (18,2 г Tрис·HCl
(трис(гидроксиметил)аминометан) растворить в 100 мл воды, довести рН с
помощью НСl).
2) 1,25 М буфер для верхнего (концентрирующего) геля, рН 6,8 (15,1 г Трис
растворить в 100 мл воды, довести рН).
3) буфер для проведения электрофореза (электродный, ×10), рН 8,2-8,3:
     В 1 л воды растворить: 6 г Трис, 28,8 г глицина, 2 г додецилсульфата
натрия (ДСН). Довести рН раствора. При использовании буфер разводится из
расчёта: 1 часть буфера на 9 частей воды.
4) 10% персульфат аммония (ПСА), катализатор полимеризации (100 мг ПСА
растворить в 1 мл воды. Хранить готовый раствор в холодильнике не более
недели).
5) 30% сток-раствор акриламида-бисакриламида (29 г акриламида (для
электрофореза) и 1 г метиленбисакриламида растворить в воде и затем довести
водой до 100 мл).
6) 0,65 М буфер для солюбилизации и инкубации белковых проб:
  а) для неденатурирующих условий: 0,785 г Трис, 3 мл 30% глицерина, 2,5 мг
  бромфенолового синего растворить в воде и довести до 10 мл;
  б) для денатурирующих условий: 0,785 г Трис, 3 мл 30% глицерина, 2,5 мг
  бромфенолового синего и 1 г ДСН растворить в воде и довести до 10 мл.
     Перед использованием оба концентрированных раствора следует развести
в 5 раз, добавить 2 мг дитиотреитола (ДTT) на 1 мл буфера или 1 мкл 1 М
раствора ДTT на 1 мл буфера.
7) Трис-глициновый буфер для электрофореза, рН 8,3 (0,6 г Трис и 2,34 г
глицина растворить в 1 л воды.

                                         24