Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 41 стр.

  3.3. Определение антиоксидантной активности фенольных соединений
     Антиоксидантную          активность        фенолов      определяли     по
модифицированному методу, первоначально разработанному Блуа (Blois, 1958),
а затем предложенному Бранд-Вилльямсом с сотрудниками (Brand-Williams et
al., 1995) для оценки антиоксидантной активности различных соединений и
экстрактов.   Спектрофотометрический       метод   основан   на   использовании
свободного стабильного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидрозила (ДФПГ).
Суть метода заключается в снижении оптической плотности раствора ДФПГ в
присутствии антиоксидантов.
                           Необходимые реактивы:
1) 0,2 мМ раствор ДФПГ (MДФПГ = 394,33) на 80% этаноле. Необходимый объём
раствора рассчитывается, принимая во внимание количество проб и построение
калибровочной кривой (7 точек).
2) сток-раствор Trolox (водорастворимый витамин Е, МTrolox = 250,29) для
построения калибровочной кривой (6 мг растворить в 2,4 мл 80% этанола).
3) 80% этанол.
                                  Ход работы
     Экстракты фенольных соединений получить, как описано в предыдущем
разделе «Определение суммы растворимых фенольных соединений».
     Реакционная смесь содержит:
     0,25 мл фенольного экстракта
     1,75 мл 80% этанола
     2 мл 0,2 мМ раствора ДФПГ.
     В контрольные пробирки вместо фенольного экстракта добавить 80%
этанол, т.е. всего 2 мл (0,25 и 1,75). Реакция запускается добавлением раствора
ДФПГ.
     Пробирки хорошо встряхнуть и оставить на 30 мин в темноте при
комнатной температуре.      По истечении времени измерить           оптическую
плотность при длине волны 517 нм.



                                           41