Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 42 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

КФУ | Казань

Составители: 

Рубрика: 

42
Построение калибровочной кривой
Калибровочная кривая по Trolox строится заново при каждом измерении
оптической плотности.
Приготовить сток-раствор Trolox. Пробирки пометить, имея в виду
повторности и контроль.
В пробирки внести определённые объёмы сток-раствора Trolox и
добавить 80% этанол в объёмах, необходимых для получения нужной
концентрации (см. таблицу).
В контрольные пробирки внести вместо раствора Trolox
соответствующий объём 80% этанола. Далее в реакционную смесь добавить по
2 мл 0,2 мМ раствора ДФПГ и провести измерения, согласно изложенной ранее
процедуре.
Кон-ция
р-раTrolox,
мкмоль
Объём сток-р-ра
Trolox для
приготовления
2 мл р-ра, мкл
Объём 80%
этанола для
приготовления
2 мл р-ра, мкл
0 0 2000
10 2 1998
25 5 1995
50 10 1990
75 15 1985
100 20 1980
125 25 1975
Расчёты
Рассчитать процент ингибирования ДФПГ для построения калибровочной
кривой и образцов:
% ингибирования ДФПГ = 100•(D
к
– D
о
)/D
к
,
где:
D
к
– оптическая плотность в отсутствии антиоксидантов (контроль);
D
о
– оптическая плотность в присутствии антиоксидантов (для калибровочной
кривой - Trolox в известных концентрациях). 
        Построение калибровочной кривой
        Калибровочная кривая по Trolox строится заново при каждом измерении
оптической плотности.
        Приготовить сток-раствор Trolox. Пробирки пометить, имея в виду
повторности и контроль.
        В пробирки внести определённые объёмы сток-раствора Trolox и
добавить 80% этанол в объёмах, необходимых для получения нужной
концентрации (см. таблицу).
        В    контрольные      пробирки        внести   вместо     раствора   Trolox
соответствующий объём 80% этанола. Далее в реакционную смесь добавить по
2 мл 0,2 мМ раствора ДФПГ и провести измерения, согласно изложенной ранее
процедуре.
                                Объём сток-р-ра          Объём 80%
                 Кон-ция
                                   Trolox для           этанола для
                р-раTrolox,
                                приготовления          приготовления
                  мкмоль
                                 2 мл р-ра, мкл        2 мл р-ра, мкл
                     0                  0                   2000
                    10                   2                 1998
                    25                   5                 1995
                    50                   10                1990
                    75                   15                1985
                    100                  20                1980
                    125                  25                1975


                                    Расчёты
        Рассчитать процент ингибирования ДФПГ для построения калибровочной
кривой и образцов:
                   % ингибирования ДФПГ = 100•(Dк – Dо)/Dк,
где:
Dк – оптическая плотность в отсутствии антиоксидантов (контроль);
Dо – оптическая плотность в присутствии антиоксидантов (для калибровочной
       кривой - Trolox в известных концентрациях).

                                               42

Страницы