Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 44 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

КФУ | Казань

Составители: 

Рубрика: 

44
центрифугировать 5 мин при 12 500 g. Супернатант (экстракт) использовать для
дальнейших измерений.
Реакционная смесь содержит:
500 мкл экстракта (буфера – в качестве контроля)
25 мкл 1% раствора K
3
[Fe(CN)
6
]
25 мкл 2% раствора NaF
1,9 мл дистиллированной воды
50 мкл 2% раствора FeCl
3
Примечание: после добавления первых трех компонентов реакционной
смеси пробирки встряхнуть и подождать 5 мин. После чего добавить
дистиллированную воду и 2% раствор FeCl
3
. Полученный раствор выдержать 5-
7 мин, периодически встряхивая, после чего проводить измерение оптической
плотности относительно контрольного раствора (реакционная смесь с буфером
вместо экстракта) при красном светофильтре (680 нм).
Построение калибровочной кривой
Приготовить 0,2% сток-раствор аскорбиновой кислоты (4 мг
аскорбиновой кислоты растворить в 2 мл дистиллированной воды).
Приготовить серию растворов с концентрацией аскорбиновой кислоты от 2 до
60 мкг/мл (см. табл.). Далее к растворам аскорбиновой кислоты с известной
Концентрация
аскорбиновой
кислоты,
мкг/мл
Объём сток-
раствора
аскорбиновой
кислоты, мкл
Объём
дистиллированной
воды, мкл
2
5 495
4
10 490
6
15 485
12
30 470
24
60 440
36
90 410
48
120 380
60
150 350 
центрифугировать 5 мин при 12 500 g. Супернатант (экстракт) использовать для
дальнейших измерений.
     Реакционная смесь содержит:
     500 мкл экстракта (буфера – в качестве контроля)
     25 мкл 1% раствора K3[Fe(CN)6]
     25 мкл 2% раствора NaF
     1,9 мл дистиллированной воды
     50 мкл 2% раствора FeCl3
     Примечание: после добавления первых трех компонентов реакционной
смеси пробирки встряхнуть и подождать 5 мин. После чего добавить
дистиллированную воду и 2% раствор FeCl3. Полученный раствор выдержать 5-
7 мин, периодически встряхивая, после чего проводить измерение оптической
плотности относительно контрольного раствора (реакционная смесь с буфером
вместо экстракта) при красном светофильтре (680 нм).
     Построение калибровочной кривой
     Приготовить    0,2%    сток-раствор         аскорбиновой    кислоты   (4   мг
аскорбиновой   кислоты     растворить   в    2    мл   дистиллированной    воды).
Приготовить серию растворов с концентрацией аскорбиновой кислоты от 2 до
60 мкг/мл (см. табл.). Далее к растворам аскорбиновой кислоты с известной


         Концентрация         Объём сток-
                                                          Объём
         аскорбиновой          раствора
                                                    дистиллированной
           кислоты,          аскорбиновой
                                                        воды, мкл
            мкг/мл           кислоты, мкл
               2                   5                       495
               4                   10                      490
               6                   15                      485
               12                  30                      470
               24                  60                      440
               36                  90                      410
               48                 120                      380
               60                 150                      350

                                            44

Страницы