Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 46 стр.

 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНДИКАТОРОВ РАЗВИТИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО
                                  СТРЕССА
              4.1. Определение содержания перекиси водорода
     Содержание перекиси водорода определяют спектрофотометрически
согласно Беллинкампи с соавт. (Bellincampi et al., 2000). Метод основан на
окислении ионов железа Fe+2 перекисью водорода до ионов железаFe+3, которые
образуют окрашенные соединения с ксиленоловым оранжевым.
                           Необходимые реактивы
1) охлажденный (-18 °С) ацетон, ч.д.а.
2) реактив ксиленоловый оранжевый.
     Приготовление реактива ксиленолового оранжевого:
     260 мкл концентрированной серной кислоты развести в небольшой
объёме     дистиллированной      воды,     добавить      9,5 мг   соли     Мора
(FeSO4·(NH4)2SO4·6H2O).    В   другом    объёме   воды     растворить    7,6   мг
ксиленолового оранжевого. Оба раствора смешать, при этом окраска
изменяется от тёмно-малиновой до светло-красной или тёмно-оранжевой. В
полученном растворе растворить 1,822 г сорбитола и довести объём до 50 мл.
Реактив оставить на ночь в холодильнике.
                                 Ход работы
     200-300 мг каллусной ткани растереть с 1,0-1,5 мл сильно охлажденного
ацетона в холодной ступке холодным пестиком. Полученный гомогенат
центрифугировать 10 мин при 12 000 g. Супернатант использовать для анализа.
     В эппендорфы внести равные объёмы полученной вытяжки и реактива
ксиленолового оранжевого, обычно берут 0,5 мл вытяжки и 0,5 мл реактива
ксиленолового оранжевого.
     Контрольная проба содержит 0,5 мл чистого ацетона и 0,5 мл реактива
ксиленолового оранжевого.
     Пробы выдерживают 45 мин при комнатной температуре.
     Прореагировавшую смесь центрифугируют в течение 5 мин при 10 000 g.
     Далее проводят измерение оптической плотности при длине волны

                                         46