Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 50 стр.

4.3. Выявление локализации перекиси водорода с помощью хлорида церия
     Локализацию перекиси водорода в клетке определяют по методике,
предложенной Бествик (Bestwick, 1995). Гистохимический метод основан на
выявлении темного преципитата пергидроксида церия, образующегося при
реакции перекиси водорода и СeCl3, на электронно-микроскопических срезах
клеток растений.
                           Необходимые реактивы:
1) 50 мМ какодилатный буфер, pH 7,2 (21,4 г Na(CH3)2AsO2·3Н2О растворить в
100 мл дистилированной воды, довести pH раствора концентрированной НСl.
Довести объём дистиллированной водой до 200 мл).
2) 50 мМ 3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота (МОПС), pH 7,2 (1,045 г
МОПС      растворить   в   100     мл   дистиллированной         воды,   довести     pH
концентрированной НСl).
3) 5 мМ СеСl3, приготовленный на 50 мМ 3-(N-морфолино) пропансульфоновой
кислоте   (pH 7,2)   (растворить    0,227 г    CeCl3   в   100    мл     50 мМ     3-(N-
морфолино)пропансульфоновой кислоты).
4) 1,25% глутаровый альдегид, приготовленный на какодилатном буфере,
pH 7,2. При приготовлении следует принимать во внимание исходную
концентрацию глутарового альдегида (ГА). При концентрации ГА 2,5% к 0,5 мл
ГА необходимо добавить 9,5мл 50 мМ какодилатного буфера. Готовить под
тягой! Токсичное вещество!
5) 1% OsO4, приготовленный на какодилатном буфере. При приготовлении
следует принимать во внимание исходную массу реактива. 1 г OsO4 растворить
в 100 мл какодилатного буфера. Оставить на сутки в холодильнике до полного
растворения. При фиксации материала на 1 мл 1% OsO4 добавить 25 мг
сахарозы. Готовить под тягой! Токсичное вещество!
     6) раствор этанола восходящей концентрации: 30%, 50%, 70%, 96%.
                                 30%        50%         70%        96%
                                этанол     этанол      этанол     этанол
         Этанол, мл               10         16          21         30
Дистиллированная вода, мл               22         14,6            7,8           0

                                              50