Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 7 стр.

           1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТНЫХ
                               ФЕРМЕНТОВ
           1.1. Определение активности растворимой пероксидазы
     Использовали    колориметрический       метод   определения   активности
пероксидазы по Бояркину (Ермаков и др., 1987). Метод основан на определении
скорости реакции окисления бензидина до образования синего продукта его
окисления в присутствии перекиси водорода и пероксидазы.
                           Необходимые реактивы:
1) 0,2 М Na-ацетатный буфер (рН 5,0). Его готовят из следующих
концентрированных растворов (сток-растворов):
0,2 М CH3COOH (2,4 мл CH3COOH довести до 200 мл дистиллированной
водой),
0,2 М CH3COONa (5,44 г CH3COONa довести до 200 мл дистиллированной
водой).
     В определенных случаях критичным является приготовление
растворов на сверхчистой (деионизированной, свободной от бактерий и
твердых частиц) воде, полученной с помощью системы Milli-Q (“Millipore”,
Франция), далее по тексту - mQ.
     Для приготовления 100 мл раствора 30 мл 0,2 М раствора CH3COOH и 70
мл 0,2 М раствора CH3COONa смешать и проверить рН буфера, при
несоответствии скорректировать с помощью CH3COOH и 5% NaOH.
     Перед      использованием      в        ацетатный    буфер      добавить
фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ) из расчета 20 мкл 100 мМ раствора
ФМСФ на 2 мл буфера (34 мг ФМСФ растворить в 2 мл изопропилового
спирта).
2) 0,01% раствор солянокислого бензидина (на 10 проб: 5,6 мг бензидина
растворить в 1 мл концентрированной уксусной кислоты и довести до 6 мл
дистиллированной водой).
3) 0,3% перекись водорода (0,5 мл 3% перекиси довести до 5 мл
дистиллированной водой).

                                         7