Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 8 стр.

                                  Ход работы
       Навеску каллусной ткани массой 200-300 мг растереть в холодной
фарфоровой ступке холодным пестиком с 0,5 мл ацетатного буфера (рН 5,0).
       Полученный гомогенат центрифугировать в течение 5 мин при 12 000 g.
Пробы поместить в холодильник при 4 °С.
       Реакционная смесь содержит:
       0,98 мл 0,2М Na-ацетатного буфера (рН 5,0)
       0,5 мл 0,01% раствора солянокислого бензидина
       0,02 мл экстракта
       0,5 мл 0,3% перекиси водорода
       Контрольная кювета содержит:
       1,48 мл 0,2 М Na-ацетатного буфера (рН 5,0)
       0,5 мл 0,01% раствора солянокислого бензидина
       0,02 мл экстракта
       Провести измерение оптической плотности при длине волны 590 нм
ежесекундно в течение 120 с.
                                    Расчёты
       Расчет активности пероксидазы в относительных единицах на один
грамм сухого веса проводится по формуле:
                               A = (ΔD•V•X)/(T•L•m•Δm),
где:
А – активность фермента,
ΔD – изменение оптической плотности (вычесть из оптической плотности в
       конце реакции оптическую плотность в начальный момент времени),
V – общий объём полученной вытяжки, мл
X – конечное разведение вытяжки в кювете (объём реакционной смеси
       разделить на количество вносимого экстракта),
T – время реакции, с,
L – толщина слоя, см,
m – масса навески, г,

                                          8