Свойства растворов высокомолекулярных соединений. Симбирских Е.С. - 24 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

МичГАУ | Мичуринск

Составители: 

Рубрика: 

24
Пирокатехин хинон
Реактивы и оборудование: трис-глициновая буферная
смесь (рН = 8,3), 5 %-й концентрирующий и 6 %-й разде-
ляющий полиакриламидные гели
, 0,1 %-й раствор бензидина
в ацетатном буфере (СН
3
СООН, СН
3
СООNа, рН = 4,7), 3 %-й
раствор перекиси водорода (H
2
O
2
), аппарат для вертикального
электрофореза в тонком слое ПААГ.
Ход опыта
Для определения изоферментного состава пероксидаз гото-
вят вытяжку из зеленой массы растений с трис-глициновым бу-
фером (рН = 8,3) в соотношении 1:10. Электрофорез проводят в
тонком слое ПААГ на пластине размерами 100х160х1,5 мм в
5%-м концентрирующем (рН = 6,9) и 6%-м градиентном разде-
ляющем (рН = 8,48) гелях.
1. Вытяжку нанесите на бороздки в ПААГ. Время электро-
фореза – около 2 ч.
2. После окончания электрофореза гелевую пластинку опус-
тите на 30мин. в 0,1 %-й раствор бензидина в ацетатном буфере
(рН = 4,7), а затем в 0,3 %-й раствор Н
2
0
2
.
На электрофореграмме проявляются зоны с пероксидазной
активностью.
3. По интенсивности окраски зоны определите активность
соответствующей изоформы.
4. Сравнивая спектры изопероксидаз устойчивых и Воспри-
имчивых сортов, выявите изоформы фермента, ответственные за
иммунитет у данной культуры.
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
                  Пирокатехин                          хинон


              Реактивы и оборудование: трис-глициновая буферная
         смесь (рН = 8,3), 5 %-й концентрирующий и 6 %-й разде-
         ляющий полиакриламидные гели


                          , 0,1 %-й раствор бензидина
         в ацетатном буфере (СН3СООН, СН3СООNа, рН = 4,7), 3 %-й
         раствор перекиси водорода (H2O2), аппарат для вертикального
         электрофореза в тонком слое ПААГ.

                                      Ход опыта
              Для определения изоферментного состава пероксидаз гото-
         вят вытяжку из зеленой массы растений с трис-глициновым бу-
         фером (рН = 8,3) в соотношении 1:10. Электрофорез проводят в
         тонком слое ПААГ на пластине размерами 100х160х1,5 мм в
         5%-м концентрирующем (рН = 6,9) и 6%-м градиентном разде-
         ляющем (рН = 8,48) гелях.
              1. Вытяжку нанесите на бороздки в ПААГ. Время электро-
         фореза – около 2 ч.
              2. После окончания электрофореза гелевую пластинку опус-
         тите на 30мин. в 0,1 %-й раствор бензидина в ацетатном буфере
         (рН = 4,7), а затем в 0,3 %-й раствор Н202.
              На электрофореграмме проявляются зоны с пероксидазной
         активностью.
              3. По интенсивности окраски зоны определите активность
         соответствующей изоформы.
              4. Сравнивая спектры изопероксидаз устойчивых и Воспри-
         имчивых сортов, выявите изоформы фермента, ответственные за
         иммунитет у данной культуры.



         24

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Страницы