ВУЗ:
Рубрика:
50
подвижный растворитель. Таким образом , хроматограмму обрабатывают 3
раза.
Затем полоску бумаги высушивают и проявляют хроматограмму
раствором нингидрина (опрыскивают из пульверизатора). Проявленную
хроматограмму нагревают 15-20 мин при 60
о
С в сушильном шкафу.
Расположение зон аминокислот по направлению движения растворителя
( сверху вниз ) следующее: аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота,
валин.
После развития хроматограммы вырезают участки пятен,
занимаемые аминокислотами, сбоку хроматограммы вырезают
контрольные участки, не содержащие аминокислот и равные по площади
зонам определяемых соединений . Вырезанные участки бумаги измельчают
ножницами и помещают в пробирки. В каждую пробирку добавляют по
10 мл элюента, объем доводят до 20 мл этиловым спиртом и встряхивают.
Элюирование происходит в результате образования комплексного
соединения аминокислот с Cu(II) оранжевого цвета, растворимого в
этиловом спирте. Пробирки с элюатами помещают в затемненное место и
оставляют на 1 ч., периодически перемешивают их содержимое .
Количественный анализ . Оптическую плотность экстрактов
измеряют на фотоэлектроколориметре при λ =530 нм . Контрольный
раствор содержит все необходимые реактивы , кроме аминокислот . Строят
градуировочный график в координатах оптическая плотность –
концентрация аминокислот, моль/ л. По графику находят концентрацию
аминокислот в анализируемом белковом гидролизате.
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА В ФАРМАЦИИ И
ХИМИКО -ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
Фармация относится к числу наиболее древних естественных наук ,
объектами исследования которой уже в далекие времена были в
большинстве случаев объекты растительного или животного
происхождения . Эти природные объекты или продукты их простейшей
переработки – отвары , экстракты и т. п . – отличаются большой сложностью
состава, поскольку включают представителей самых разнообразных
классов органических соединений . Обнаружение , а тем более
количественное определение в этих сложных объектах физиологически
активных веществ являлось первоочередной задачей фармации, однако
решалась она из - за несовершенства и трудоемкости существовавших до
второй половины ХХ в. методов разделения крайне медленно. Решение
проблемы выделения индивидуальных природных соединений в качестве
лекарственных веществ из природных источников сырья и проблемы
контроля чистоты появившихся в конце Х IX – начале XX в . синтетических
лекарственных препаратов также существенно сдерживалось отсутствием
универсальных методов разделения сложных смесей органических
соединений .
50 под в ижны й раств оритель. Т аким образ ом, хроматог раммуобрабаты в ают 3 раз а. Затем полоску бумаг и в ы суш ив ают и проя в ля ют хроматог рамму раств ором нинг ид рина (опры скив ают из пульв ериз атора). П роя в ленную хроматограмму наг рев ают 15-20 мин при 60 оС в суш ильном ш кафу. Расположение з он ам инокислот по направ лению д в ижения раств орителя (св ерху в низ ) след ующ ее: аспараг инов ая кислота, г лутам инов ая кислота, в алин. П осле раз в ития хроматог раммы в ы рез ают участки пя тен, з анимаемы е аминокислотами, сбоку хроматограммы в ы рез ают контрольны е участки, не сод ержащ ие ам инокислот и рав ны е поплощ ад и з онам опред еля ем ы х соед инений. В ы рез анны е участки бумаг и из мельчают ножницами и помещ ают в пробирки. В кажд ую пробирку д обав ля ют по 10 мл э люента, объем д ов од я т д о20 мл э тилов ы м спиртом и в стря хив ают. Э люиров ание происход ит в рез ультате образ ов ания ком плексного соед инения ам инокислот с Cu(II) оранжев ого цв ета, раств оримого в э тилов ом спирте. П робирки с э люатами помещ ают в з атемненное местои остав ля ютна1 ч., период ически перемеш ив аютих сод ержимое. К оличеств енны й анализ . О птическую плотность э кстрактов из меря ют на фотоэ лектроколориметре при λ=530 нм. К онтрольны й раств ор сод ержит в се необход имы е реактив ы , кроме аминокислот. Строя т град уиров очны й г рафик в коорд инатах оптическая плотность – концентрация ам инокислот, моль/л. П о г рафику наход я т концентрацию аминокислотв анализ ируемом белков ом гид ролиз ате. Х РО М АТО ГРАФ И ЧЕС КИ Е М ЕТО ДЫ АНА ЛИ ЗА В Ф АРМ АЦ И И И Х И М И КО -Ф АРМ А Ц ЕВТИ ЧЕС КО Й ПРО М Ы Ш ЛЕННО С ТИ Ф армация относится к числу наиболее д рев них естеств енны х наук, объектами исслед ов ания которой уже в д алекие в ремена бы ли в больш инств е случаев объекты растительного или жив отного происхожд ения . Э ти природ ны е объекты или прод укты их простейш ей переработки – отв ары , э кстракты и т.п. – отличаются больш ой сложностью состав а, поскольку в ключают пред став ителей самы х раз нообраз ны х классов орг анических соед инений. О бнаружение, а тем более количеств енное опред еление в э тих сложны х объектах физ иолог ически актив ны х в ещ еств я в ля лось перв оочеред ной з ад ачей фармации, од нако реш алась она из -з а несов ерш енств а и труд оемкости сущ еств ов ав ш их д о в торой полов ины Х Х в . метод ов раз д еления крайне мед ленно. Реш ение проблемы в ы д еления инд ив ид уальны х природ ны х соед инений в качеств е лекарств енны х в ещ еств из природ ны х источников сы рья и проблем ы контроля чистоты поя в ив ш ихся в конце Х IX – начале XX в . синтетических лекарств енны х препаратов также сущ еств енносд ержив алось отсутств ием унив ерсальны х метод ов раз д еления сложны х смесей орг анических соед инений.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 48
- 49
- 50
- 51
- 52
- …
- следующая ›
- последняя »