Практикум по биологической химии. Володина Г.Б. - 44 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГТУ | Тамбов

Составители: 

Рубрика: 

где V – скорость ферментативной реакции; V
max
– предельное постоянное значение скорости для данной
реакции; [S] – концентрация субстрата; К
М
– константа Михаэлиса для исследуемой пары фермент –
субстрат.
Экспериментальная часть
Опыт 1 Специфичность действия сахаразы дрожжей
Реактивы
1 Пекарские дрожжи.
2 Раствор крахмала 1 %.
3 Раствор сахарозы 1 %.
4 Сульфат меди (1 % водный раствор).
5 Гидроксид натрия (10 % водный раствор).
6 Дистиллированная вода.
7 Весы.
8 Стеклянная воронка.
9 Бумажный фильтр.
Посуда и приборы
1 Пробирки
2 Термометр – 1.
3 Держатель
4 Ступка фарфоровая с пестиком
5 Водяная баня – 1.
6 Секундомер – 1.
Фермент сахараза катализирует гидролитическое расщепление сахарозы с образованием глюкозы и
фруктозы.
Действие фермента можно обнаружить по появлению свободной глюкозы, дающей положительную
качественную реакцию на свободный полуацетальный гидроксил (реакция "серебряного зеркала", с ре-
активом Фелинга и т.п.). Сахароза не содержит свободного полуацетального гидроксила, поэтому в по-
добные превращения не вступает.
Ход работы
1 Для получения сахаразы навеску 0,5 г высушенных пекарских дрожжей тщательно растирают в
ступке для разрушения дрожжевых клеток. Затем в ступку добавляют 5 мл дистиллированной воды и
вновь продолжают растирать полученную массу. Через некоторое время полученную суспензию фильт-
руют через складчатый фильтр. В фильтрате и содержится фермент сахараза.
2 В 2 пробирки помещают по 1 мл раствора сахаразы и приливают: в 1 пробирку – 1 мл 5 % рас-
твора сахарозы; во 2 – 1 мл 5 % раствора крахмала. Пробирки помещают в водяную баню с температу-
рой 36…38 °С и выдерживают при этой температуре 15 мин.
3 Из каждой пробирки отбирают пробы объемом около 0,5 мл; добавляют в пробу по 10 капель 10
% раствора NaOH и по 3 капли 1 % раствора CuSO
4
. Затем пробы перемешивают и нагревают до кипе-
ния. Образование красного или желтого осадка свидетельствует о наличии в пробе глюкозы.
Полученные результаты оформляют в виде таблицы.
Таблица

Страницы