Практикум по биологической химии. Володина Г.Б. - 45 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГТУ | Тамбов

Составители: 

Рубрика: 

№
пробы
Фермент
(сахараза), мл
Раствор
сахарозы, мл
Раствор
крахмала, мл
Наличие
свободной
глюкозы
1 1 1
2 1 1
Опыт 2 Исследование свойств амилазы
Реактивы Посуда и приборы
1 Раствор амилазы 1 Стакан химический
2 Раствор крахмала (0,1 %) 2 Термометр
3 Раствор йода в йодиде калия 3 Пробирки
4 Кислота соляная (разб.) 4 Капельница
5 Раствор гидрофосфата натрия (0,2М) 5 Водяная баня
6 Раствор лимонной кислоты (0,1М) 6 Секундомер
7 Весы
8 Стеклянная воронка
9 Бумажный фильтр
Амилаза относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов до более про-
стых соединений (ди- и моносахаридов). Вырабатывается в слюнных железах и поджелудочной же-
лезе. Резкое увеличение активности амилазы в сыворотке крови имеет решающее значение при ди-
агностике заболеваний поджелудочной железы.
Фермент амилаза ускоряет гидролиз α-гликозидных связей молекулы крахмала. Продукты гид-
ролиза не образуют синего комплекса с раствором йода в йодиде калия
амилаза
(С
6
Н
10
О
5
)
n
+ n HOH → Продукты гидролиза (nС
6
Н
12
О
6
).
1 Ферментативный гидролиз крахмала.
В две пробирки налить по 5 мл 0,1 % раствора крахмала. Затем в одну пробирку внести 1 мл
раствора амилазы. Пробирки поставить в стакан с теплой водой на 10 мин (температура 37…40 °С).
После охлаждения в обе пробирки добавить по 1 капле раствора йода в йодиде калия. Сделать вы-
вод об устойчивости крахмала к гидролизу (в присутствии фермента и без фермента).
2 Влияние рН среды.
В три пробирки (1, 2, 3) налить по 5 мл 0,1 % раствора крахмала. Затем в пробирки 1 и 2 налить по 1
мл воды, в пробирку 3–1 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты. В пробирки 1, 3 добавить по 1 мл раствора
амилазы, в пробирку 2–1 мл раствора амилазы после кипячения. Все 3 пробирки поставить в стакан с
теплой водой на 20 мин. После охлаждения в каждую из пробирок добавить по 1–2 капли раствора йода
в йодиде калия. Записать аналитический эффект и сделать выводы.
Сравнить полученные результаты с данными: только в пробирке 1 не наблюдается изменение цвета,
так как происходит расщепление крахмала. В пробирке 2 фермент необратимо инактивирован при на-
гревании, в пробирке 3 реакция протекает медленно вследствие высокой кислотности раствора. Поэто-
му во 2-й и 3-й пробирках должно наблюдаться синее окрашивание.
3 Влияние температуры.
В пробирки 1, 2, 3, 4 поместить по 1 мл 0,1% раствора крахмала. Пробирку 1 поместить в стакан
с холодной водой, 2, 3 – в стакан с теплой водой (38…40 °С), пробирку 4 – в кипящую водяную ба-

Страницы