Практикум по биологической химии. Володина Г.Б. - 46 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГТУ | Тамбов

Составители: 

Рубрика: 

ню. Предварительно в каждую пробирку следует добавить: в 1, 2, 4 – 0,5 мл раствора амилазы, в 3 –
0,5 мл прокипяченного раствора амилазы. Периодически через каждые 5 мин следует из пробирки 2
брать небольшое количество раствора пипеткой (2−3 капли) и вносить в пробирку с 3 мл сильно
разбавленного раствора йода в йодиде калия. Когда получена отрицательная проба (раствор не ок-
рашивается), во все пробирки следует добавить по 2 мл 1н. раствора серной кислоты и охладить их.
Затем во все пробирки добавить по 2−3 капли раствора йода в йодиде калия. Записать аналитиче-
ский эффект и сделать выводы.
4 Определение оптимального значения рН среды.
Предварительно следует приготовить растворы буфера.
№ 1 2 3 4 5 6 7
рН 4,0 5,0 5,4 6,2 6,8 7,4 8,0
Объем 0,2М раствора
Na
2
HPO
4
, мл 7,71 10,30 11,15 13,22 15,45 18,17 19,45
Объем 0,1М раствора
лимонной кислоты, мл 12,29 9,70 8,85 6,78 4,55 1,83 0,55
В пробирки 1−7 поместить по 5 мл раствора соответствующего буфера. Затем в каждую пробирку
налить по 4 мл 0,25 % раствора крахмала и по 1 мл раствора амилазы. Все пробирки поместить в стакан
с теплой водой (37…
40 °С). Периодически через 3−5 мин проводить реакцию с раствором йода в йодиде калия, для чего 1−2
капли исследуемого раствора поместить в пробирки с разбавленным растворами йода в йодиде калия.
Вначале все пробирки дают синее окрашивание, по истечении некоторого времени цвет изменяется в
красно-фиолетовый (или красный), и затем окраска полностью исчезает. Для каждой пробирки отметить
время (с точностью до 0,5 мин), когда проба перестает давать положительный результат (синее окраши-
вание). Этот момент можно считать концом амилолитического расщепления. Полученные результаты
изобразить графически. По оси абсцисс нанести значения рН, а по оси ординат – время гидролиза. По-
лученные точки соединить плавной кривой (рис. 4).
Время, мин
Рис. 4 Кривые прямой и обратной зависимости активности амилазы
от рН среды
Полученные данные записать в таблицу.
Номер пробирки 1 2 3 4 5 6 7
Время, мин 4,0 5,0 5,4 6,2 6,8 7,4 8,0
1/время

Страницы