Биотехнология: Монография. Волова Т.Г. - 129 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

128
ные на основе плазмиды CoIEI. Современные плазмидные векторы в при-
сутствии хлорамфеникола способны к репликации, независимо от деления
хромосомы, количество копий плазмид при этом может возрастать до 1–
2.10
3
копий на клетку.
При получении библиотеки генов растений и высших животных, у ко-
торых общая длина генома составляет до 3
⋅10
9
и более, емкость вектора
часто играет решающую роль. В данном случае в качестве вектора ис-
пользуют ДНК фага
λ. При помощи специальных методов рекомбинант-
ные ДНК вводят прямо в фаговые головки. Еще большей емкостью обла-
дают плазмиды – космиды (до 40 кб), у которых cos-фрагмент генома фага
λ, участвует в упаковке ДНК в фаговую частицу на конечной стадии раз-
вития. Для упаковки ДНК необходимо, чтобы ДНК содержала COS-
участок и ее размер был примерно равным размеру генома ага l. Достиг-
нутые методы упаковки ДНК в фаговую головку при помощи космид по-
зволяют получать библиотеки генов практически любых организмов.
Перенос генов
в клетки организма-реципиента
Перенос рекомбинантных ДНК осуществляется путем трансформа-
ции или конъюгации. Трансформация – это процесс изменения генетиче-
ских свойств клетки в результате проникновения в нее чужеродной ДНК.
Впервые она была обнаружена у пневмококков Ф. Гиффитом, который
показал, что некоторые клетки невирулентных штаммов бактерий при
заражении ими мышей совместно с вирулентными
штаммами приобрета-
ют патогенные свойства. В дальнейшем трансформация была продемонст-
рирована и изучена у различных видов бактерий.
Установлено, что к трансформации способны лишь некоторые, так
называемые «компетентные», клетки (способные включать чужеродную
ДНК и синтезирующие особый трансформирующий белок). Компетент-
ность клетки определяется также факторами внешней среды. Этому мо-
жет способствовать обработка
клеток полиэтиленгликолем или хлори-
дом кальция. После проникновения в клетку одна из нитей рекомби-
нантной ДНК деградирует, а другая за счет рекомбинации с гомологич-
ным участком реципиентной ДНК может включиться в хромосому или
внехромосомную единицу. Трансформация является наиболее универ-
сальным способом передачи генетической информации и имеет наи-
большее значение для генетических
технологий.
Конъюгация – один из способов обмена генетического материала, при
котором происходит однонаправленный перенос генетической информа-
ции от донора к реципиенту. Этот перенос находится под контролем осо-
бых конъюгативных плазмид (фактор фертильности). Перенос информа-
ции от донорской клетки в реципиентную осуществляется через специ-
альные половые ворсинки (пили). Возможна передача информации и
с
помощью неконъюгативных плазмид при участии плазмид-помощниц.

Страницы