Большой практикум по биоэкологии. Ч. 1. Воскресенская О.Л - 64 стр.

небольшую стеклянную или пластмассовую центрифужную пробирку.
Прибавляют равный объем 8%-го раствора трихлоруксусной кислоты (1
мл). Центрифугируют 10 мин при 4 тыс. об./мин, при этом, происходит
осаждение белка. Надосадочную жидкость сливают. Белковый осадок
промывают ацетоном до тех пор, пока осадок не станет бесцветным, и
снова центрифугируют. К осадку приливают 1 мл 2%-ой трихлоруксус-
ной кислоты, содержимое перемешивают стеклянной палочкой и цен-
трифугируют в течение 5-8 мин при 4 тыс. об./мин.
         2. Надосадочную жидкость сливают, а к белковому осадку при-
бавляют 0,1 мл 1н NаОН для растворения белка. Оставляют на 30 мин,
если осадок белка трудно растворяется, то его подогревают на водяной
бане (на этом этапе работу можно прервать и пробирки с белковым
осадком для растворения оставить на ночь). После растворения белка в
пробирки наливают 3 мл дистиллированной воды.
         3. Для анализа берут 1 мл щелочного раствора белка, прибав-
ляют 5 мл меднокарбонатного раствора (реактив С). Через 10 мин в
пробирки вносят 0,5 мл реактива Фолина. Смесь перемешивают и
оставляют при комнатной температуре на 20–30 мин для развития
окраски. Интенсивность окраски измеряют на фотоколориметре с крас-
ным светофильтром (длина волны =750 нм).
         Контроль: 0,1н раствор NаОН (1 мл) + меднокарбонатный рас-
твор (реактив С) (5 мл) + 1н реактив Фолина (0,5 мл);
         опыт: щелочной раствор альбумина (1 мл) + меднокарбонатный
раствор (реактив С) (5 мл) + 1н реактив Фолина (через 10 мин) (0,5 мл).
         Смесь перемешивают и через 30 мин колориметрируют на ФЭКе.
         4. Концентрацию белка в исследуемых растворах рассчитывают
по калибровочной кривой. Калибровочная кривая в интервале 0,02–0,25
мг белка в пробе строится по сывороточному альбумину.
         Берут 50 мг альбумина (БСА) и растворяют его в 100 мл воды
или 0,1н раствора NаОН. Затем колбу ставят в термостат при темпера-
туре 37–40°С на 1 ч для гидролиза. После гидролиза раствор альбумина
разливают в пробирки согласно данным таблицы 22, добавив туда опре-
деленное количество щелочи.
         5. Содержания белка в растительном материале вычисляют по
формуле: X       А E
                       ,
                Н
где А – концентрация белка, найденная по графику и соответствующая
оптической плотности испытанного раствора или показания прибора,
переведенные на ctg α;
    Е – разведение;
    Н – навеска растительного материала (0,5 г).

64