Большой практикум по биоэкологии. Ч. 1. Воскресенская О.Л - 66 стр.

          реактив С (меднокарбонатный раствор) готовят перед постановкой опыта сме-
шиванием реактивов А, В, Д в соотношении 100:1:1 мл;
          реактив Фолина: 100 г вольфрамата натрия и 25 г молибдата натрия рас-
творяют в 700 мл дистиллированной воды. К смеси добавляют 50 мл 85%-ного рас-
твора фосфорной и 100 мл соляной кислот. Затем этот раствор кипятят 10 часов с
обратным холодильником в вытяжном шкафу. После этого в колбу добавляют 150 г
сернокислого лития, 50 мл дистиллированной и 5 капель бромной воды. Смесь кипя-
тят в течение 15 мин в вытяжном шкафу для удаления избытка брома, после охла-
ждения доводят объем до 1 л. Затем смесь фильтруют и хранят в темной склянке с
притертой пробкой. Раствор должен быть ярко-желтого цвета. Для определения кон-
центрации реактива Фолина: 1-2 мл реактива разводят в 10 раз и титруют 0,1н рас-
твором щелочи по фенолфталеину.

                 6.1.2. Определение свободного пролина

        Биологические функции органических протекторных соединений
крайне многообразны. Например, пролин, который является в раститель-
ном мире самым универсальным осмолитом, может выступать в роли ис-
точника азота, углерода и энергетического субстрата. Он обладает также
антиоксидантным действием, понижая количество активных форм кисло-
рода. Пролин регулирует также экспрессию стрессорных генов. При стрес-
совых воздействиях накопление свободного пролина рассматривают как
один из механизмов биохимической адаптации.
         Реактивы и оборудование: 18%-ный раствор сахарозы; 3%-ный раствор
сульфосалициловой кислоты; нингидрин; ледяная уксусная кислота; фосфорная кис-
лота (6 моль/л); толуол; пролин; торзионные весы; сушильный шкаф; ступки; водя-
ная баня; кюветы со льдом; пробирки; стеклянные воронки; пипетки; складчатые
фильтры; колбы на 50 мл; чашки Петри; ФЭК.

         Ход работы:
        1. В чашках Петри на фильтровальной бумаге в воде выращи-
вают 7-10-дневные проростки овса, пшеницы, гороха или фасоли. Затем
воду сливают и заливают в чашки 18%-ный раствор сахарозы. Через 48
или 72 ч определяют содержание пролина в срезанных листьях после
осматического стресса, предварительно определив его исходное содер-
жание. Параллельно берут две-три пробы листьев (100 мг), высушивают
их при 1050С и находят сухую массу.
        2. Для определения свободного пролина берут три пробы листь-
ев по 1 г каждая. Мелко их нарезают, заливают 10 мл 3%-го раствора
сульфосалициловой кислоты и растирают в течение 5 мин в ступках до
получения однородной массы, растертую массу переносят на фильтр.
        3. Берут 2 мл фильтрата, помещают в пробирки и добавляют 2
мл реагента, который готовят непосредственно перед опытом, растворяя
1,25 г нингидрина в смеси 30 мл ледяной уксусной кислоты и 20 мл

66