Биохимия белков. Яковлева М.Н - 10 стр.

              1. Радиальная (круговая ) хроматография
   Для разделения смеси аминокислот используется растворитель,
состоящий из смеси н-бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды
в соотношении 4:1:5. Приготовленная смесь встряхивается в
делительной воронке в течение 5 минут, а затем отстаивается
7-10 часов, после чего нижний слой используется для насыщения
хроматографической камеры парами, а верхний - для разделения
аминокислот. Хроматографической камерой служит эксикатор.
    Ход работы.
    1. Хроматографическую бумагу вырезают в форме диска,
диаметр которого соответствует внутренним размерам диаметра
эксикатора. В центр диска (на точку старта) наносят
микропипеткой в несколько приемов 0,005-0,01 мл исследуемой
смеси аминокислот. Нанесение смеси следует проводить очень
аккуратно, слегка касаясь микропипеткой стартовой точки, чтобы
диаметр мокрого пятна был не более 5 мм. После каждого
нанесения пятно подсушивают над электроплиткой или в
термостате.
    2. В центре хроматограмм делают иглой отверстие, в которое
пропускают фитилек из сложенной вчетверо нити. Хроматограмму
помещают в эксикатор, на дно которого предварительно наливают
верхний слой растворителя. Проверяют положение фитилька и
хроматограммы: конец фитилька должен быть погружен в
растворитель, а края хроматограммы должны находиться на
выступах эксикатора. Закрывают эксикатор крышкой.
    3. Растворитель поднимается вверх по фитильку, а затем
 радиально распространяется по бумаге от центра. Когда
 растворитель достигнет края бумаги, ее вынимают из эксикатора,
 высушивают под тягой, обрабатывают 0,5% раствором
 нингидрина (готовится на ацетоне или спирте) и помещают в
 сушильный шкаф при 60-70оС на 10-15 минут. На хроматограмме
 появляются      сине-фиолетовые пятна, каждое из которых
 соответствует отдельной аминокислоте.

                   2. Нисходящая хроматография
    В качестве хроматографической камеры используют высокие
стеклянные банки с выступом в верхней части. На выступ в строго

   10