Биохимия белков. Яковлева М.Н - 11 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ПетрГУ | Петрозаводск

Составители: 

Рубрика: 

11
горизонтальном положении ставят лодочку - специальный
стеклянный сосуд для растворителя.
Ход работы.
1. Из хроматографической бумаги вырезают полоску шириной
5 см и длиной, примерно соответствующей высоте камеры. На
расстоянии 10 см от конца полоски проводят простым карандашом
стартовую линию, в середине которой отмечают точку старта. На
стартовую точку микропипеткой наносят 0,005-0,01 мл смеси
аминокислот (в несколько приемов, диаметр мокрого пятна не
более 5 мм), периодически просушивая
бумагу над электрической
плиткой (или над настольной лампой).
2. На дно хроматографической камеры наливают небольшое
количество нижнего слоя растворителя, а в установленную
лодочку - верхний слой растворителя. Хроматограмму с
нанесенной смесью аминокислот помещают в камеру так, чтобы
ближний к старту конец был опущен в лодочку и зафиксирован в
ней предметным стеклом, а
другой висел вертикально, не касаясь
стенок камеры. Камеру закрывают крышкой и оставляют при
комнатной температуре на 18-20 часов.
3. Растворитель продвигается по хроматограмме сверху вниз,
и когда фронт его приблизится к нижнему краю бумаги,
хроматограмму вынимают из камеры и высушивают под тягой.
Затем ее обрабатывают 0,5% раствором нингидрина и помещают в
сушильный шкаф
при 60-70
о
С на 10-15 минут для развития
окраски, после чего на ней появляются пятна сине-фиолетового
или лилового цвета, соответствующие аминокислотам.
Оформление работы
1. Зарисовать хроматограммы и хроматографические камеры.
2. Рассчитать коэффициенты распределения аминокислот,
разделенных методами радиальной и нисходящей хроматографии
на бумаге.
Техника безопасности
1. Осторожно обращайтесь с растворителем, содержащим
бутиловый спирт и ледяную уксусную кислоту. Растворитель
обладает резким неприятным запахом, пары его могут вызвать
ожоги слизистых.
2. Соблюдайте правила пожарной безопасности при
пользовании электрической плиткой и сушильным шкафом. 
горизонтальном положении ставят лодочку - специальный
стеклянный сосуд для растворителя.
    Ход работы.
    1. Из хроматографической бумаги вырезают полоску шириной
5 см и длиной, примерно соответствующей высоте камеры. На
расстоянии 10 см от конца полоски проводят простым карандашом
стартовую линию, в середине которой отмечают точку старта. На
стартовую точку микропипеткой наносят 0,005-0,01 мл смеси
аминокислот (в несколько приемов, диаметр мокрого пятна не
более 5 мм), периодически просушивая бумагу над электрической
плиткой (или над настольной лампой).
    2. На дно хроматографической камеры наливают небольшое
количество нижнего слоя растворителя, а в установленную
лодочку - верхний слой растворителя. Хроматограмму с
нанесенной смесью аминокислот помещают в камеру так, чтобы
ближний к старту конец был опущен в лодочку и зафиксирован в
ней предметным стеклом, а другой висел вертикально, не касаясь
стенок камеры. Камеру закрывают крышкой и оставляют при
комнатной температуре на 18-20 часов.
    3. Растворитель продвигается по хроматограмме сверху вниз,
и когда фронт его приблизится к нижнему краю бумаги,
хроматограмму вынимают из камеры и высушивают под тягой.
Затем ее обрабатывают 0,5% раствором нингидрина и помещают в
сушильный шкаф при 60-70оС на 10-15 минут для развития
окраски, после чего на ней появляются пятна сине-фиолетового
или лилового цвета, соответствующие аминокислотам.

                       Оформление работы
    1. Зарисовать хроматограммы и хроматографические камеры.
    2. Рассчитать коэффициенты распределения аминокислот,
разделенных методами радиальной и нисходящей хроматографии
на бумаге.
                      Техника безопасности
    1. Осторожно обращайтесь с растворителем, содержащим
бутиловый спирт и ледяную уксусную кислоту. Растворитель
обладает резким неприятным запахом, пары его могут вызвать
ожоги слизистых.
    2. Соблюдайте правила пожарной безопасности при
пользовании электрической плиткой и сушильным шкафом.
                                                          11

Страницы