Составители:
Рубрика:
30
РАБОТА 15. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИБОЗЫ
ПО МЕТОДУ МЕЙБАУМА
Рибоза входит в состав РНК, нуклеотидов и некоторых
коферментов. Существуют колориметрические методы
определения содержания указанных веществ, основанные на
количественном определении рибозы.
Метод Мейбаума основан на способности рибозы к
дегидратации с образованием фурфурола, дающего с орцином
соединение, окрашенное в сине-зеленый цвет. Интенсивность
окраски
пропорциональна содержанию рибозы.
Ход работы
1. Построение калибровочной кривой
В пять сухих пробирок вносят основной стандартный раствор
рибозы (содержит 12,5 мкг рибозы в 1 мл) и дистиллированную
воду в количествах, указанных в таблице:
№ проб Стандартный
раствор (мл)
Н
2
О (мл) Количество рибозы
в пробе (мкг)
1 0,2 0,8 2,5
2 0,4 0,6 5,0
3 0,6 0,4 7,5
4 0,8 0,2 10,0
5 1,0 - 12,5
В контрольную пробирку наливают 1 мл дистиллированной
воды. Во все пробирки добавляют автоматической пипеткой по
1 мл орцинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую
водяную баню на 20 минут. Затем пробирки охлаждают под струей
холодной воды, добавляют по 3 мл дистиллированной воды и
содержимое перемешивают. Рабочие стандартные растворы
колориметрируют на КФК-2 против контроля
в кюветах на 10 мл с
красным светофильтром (длина волны 670 нм). Результаты
определения оптической плотности используют для построения
калибровочной кривой.
2. Определение количества рибозы в исследуемом
растворе
К 1 мл исследуемого раствора рибозы добавляют 1 мл
орцинового реактива и далее анализ проводят так же, как при
построении калибровочной кривой.
РАБОТА 15. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИБОЗЫ
ПО МЕТОДУ МЕЙБАУМА
Рибоза входит в состав РНК, нуклеотидов и некоторых
коферментов. Существуют колориметрические методы
определения содержания указанных веществ, основанные на
количественном определении рибозы.
Метод Мейбаума основан на способности рибозы к
дегидратации с образованием фурфурола, дающего с орцином
соединение, окрашенное в сине-зеленый цвет. Интенсивность
окраски пропорциональна содержанию рибозы.
Ход работы
1. Построение калибровочной кривой
В пять сухих пробирок вносят основной стандартный раствор
рибозы (содержит 12,5 мкг рибозы в 1 мл) и дистиллированную
воду в количествах, указанных в таблице:
№ проб Стандартный Н2О (мл) Количество рибозы
раствор (мл) в пробе (мкг)
1 0,2 0,8 2,5
2 0,4 0,6 5,0
3 0,6 0,4 7,5
4 0,8 0,2 10,0
5 1,0 - 12,5
В контрольную пробирку наливают 1 мл дистиллированной
воды. Во все пробирки добавляют автоматической пипеткой по
1 мл орцинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую
водяную баню на 20 минут. Затем пробирки охлаждают под струей
холодной воды, добавляют по 3 мл дистиллированной воды и
содержимое перемешивают. Рабочие стандартные растворы
колориметрируют на КФК-2 против контроля в кюветах на 10 мл с
красным светофильтром (длина волны 670 нм). Результаты
определения оптической плотности используют для построения
калибровочной кривой.
2. Определение количества рибозы в исследуемом растворе
К 1 мл исследуемого раствора рибозы добавляют 1 мл
орцинового реактива и далее анализ проводят так же, как при
построении калибровочной кривой.
30
