Биохимия белков. Яковлева М.Н - 27 стр.

UptoLike

27
1. Взвешивают 2,5 г пекарских дрожжей. Навеску помещают в
колбочку и добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты.
Колбочку закрывают пробкой, в которую вставлен обратный
холодильник, и ставят на песочную баню. Через 1 час после начала
кипения жидкости гидролиз прекращают. После охлаждения
гидролизат фильтруют через бумажный фильтр.
2. С фильтратом проделывают качественные реакции на
составные части
нуклеопротеидов:
а) Биуретовая реакция на полипептиды.
К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора
гидроксида натрия и 1 каплю 1% раствора сульфата меди.
Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
б) Серебряная проба на пуриновые основания.
К 10 каплям гидролизата добавляют по каплям
концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции
(проверить по индикаторной бумажке, опущенной в пробирку
),
затем 10 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При
стоянии через 3-5 минут выпадает рыхлый осадок серебряных
соединений пуриновых оснований (аденина и гуанина),
окрашенный в светло-коричневый (бурый) цвет.
в) Проба Молиша на пентозу.
К 10 каплям гидролизата добавляют 3 капли 1% спиртового
раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно
приливают 20-30 капель концентрированной серной кислоты.
После перемешивания развивается красное окрашивание,
обусловленное продуктом конденсации тимола с фурфуролом,
образовавшимся из пентозы.
г) Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу.
К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30% раствора
гидроксида натрия и 1-3 капли 7% раствора сульфата меди до
появления неисчезающей мути гидроксида меди (II);
перемешивают. При нагревании до кипения выпадает желтый
осадок гидроксида меди (I) или
красный осадок оксида меди (I).
д) Качественная реакция на рибозу и дезоксирибозу с
дифениламином.
Дифениламин дает синее окрашивание с дезоксирибозой и
зеленое - с рибозой. К 5 каплям гидролизата добавляют 20 капель
1% раствора дифениламина и пробирку ставят в кипящую водяную
баню на 15 минут. Развивается сине-зеленое окрашивание.
    1. Взвешивают 2,5 г пекарских дрожжей. Навеску помещают в
колбочку и добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты.
Колбочку закрывают пробкой, в которую вставлен обратный
холодильник, и ставят на песочную баню. Через 1 час после начала
кипения жидкости гидролиз прекращают. После охлаждения
гидролизат фильтруют через бумажный фильтр.
    2. С фильтратом проделывают качественные реакции на
составные части нуклеопротеидов:
    а) Биуретовая реакция на полипептиды.
    К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора
гидроксида натрия и 1 каплю 1% раствора сульфата меди.
Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
    б) Серебряная проба на пуриновые основания.
    К 10 каплям гидролизата добавляют по каплям
концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции
(проверить по индикаторной бумажке, опущенной в пробирку),
затем 10 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При
стоянии через 3-5 минут выпадает рыхлый осадок серебряных
соединений пуриновых оснований (аденина и гуанина),
окрашенный в светло-коричневый (бурый) цвет.
    в) Проба Молиша на пентозу.
    К 10 каплям гидролизата добавляют 3 капли 1% спиртового
раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно
приливают 20-30 капель концентрированной серной кислоты.
После перемешивания развивается красное окрашивание,
обусловленное продуктом конденсации тимола с фурфуролом,
образовавшимся из пентозы.
    г) Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу.
    К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30% раствора
гидроксида натрия и 1-3 капли 7% раствора сульфата меди до
появления     неисчезающей     мути   гидроксида меди        (II);
перемешивают. При нагревании до кипения выпадает желтый
осадок гидроксида меди (I) или красный осадок оксида меди (I).
    д) Качественная реакция на рибозу и дезоксирибозу с
дифениламином.
    Дифениламин дает синее окрашивание с дезоксирибозой и
зеленое - с рибозой. К 5 каплям гидролизата добавляют 20 капель
1% раствора дифениламина и пробирку ставят в кипящую водяную
баню на 15 минут. Развивается сине-зеленое окрашивание.
                                                              27