Органическая химия и основы биохимии. Часть 2. Абакумова Н.А - 58 стр.

UptoLike

56
повышенных температур, действия кислот или щелочей, иногда даже
приходится работать в отсутствие кислорода воздуха. Для выделения
биологических регуляторов обычно используют на тех или иных ста-
диях различные высокоэффективные приёмы разделения (разные виды
хроматографии, противоточное распределение, многократные пере-
кристаллизации и др.).
Другим обстоятельством, очень осложняющим очистку природ-
ного биологического регулятора, является необходимость специфиче-
ских, очень сложных и капризных методов определения их количества
во фракциях.
В-третьих, очень трудно оценить биологическую активность вы-
деленных гормонов, поскольку она зависит от ряда факторов, многие
из которых трудно учесть: порода животных, их диета, время года,
условия содержания и т.д. Поэтому нередко приходится вместо глав-
ного их биологического действия брать другое, более просто наблю-
даемое и регистрируемое явление. Например, при изучении андроген-
ных гормонов зачастую используется тест на почернение клюва у во-
робья. Поэтому не надо удивляться, что в течение длительного време-
ни учёные занимаются такой, казалось бы, смешной проблемой, как
тщательное изучение периода почернения воробьиного клюва. Или
определение активности гормона роста (соматотропина) определяют
по росту хряща большой берцовой кости крысы (тибиатест).
Первыми выделили гипоталомические гормоны в чистом виде и
выяснили их химическую структуру Роджер Гиллемин из Сан-Диего и
Эндрю Шелли из Нью-Орлеана. В 1977 г. они получили за это Нобе-
левскую премию и разделили награду с Розалиндой Ялоу, разработав-
шей чрезвычайно чувствительный радиоиммунологический метод оп-
ределения концентрации гормонов.
3. Метод генной инженерии.
Метод основан на выделении гена соответствующего пептидного
гормона (например, инсулина или соматотропина) и включении его в
геном бактериальных клеток, приобретающих таким образом способ-
ность к синтезу данного гормона. В результате размножения образу-
ются большие массы бактерий, активно синтезирующих гормоны.
5.3. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Нестимулированный уровень гормонов в крови очень низок, он
расположен в пределах от микромолярных (10
–6
М) до пикомолярных
(10
–12
М) концентраций. В этом отношении гормоны резко отличают-
ся, например, от глюкозы, содержащейся в крови в миллимолярных
концентрациях (4·10
–3
М). В силу низкой концентрации гормонов их