ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
28
рН 5 и снова фильтруют. Кратность упаривания точно определяют и учитывают при
расчете масс моносахаридов.
Приготовление растворителя. Для приготовления смеси этилацетат —
пиридин — вода (5 : 1 : 5) 150 мл этилацетата и 30 мл пиридина хорошо
встряхивают в делительной воронке вместимостью 500 мл, затем прибавляют к
смеси 150 мл дистиллированной воды и снова хорошо встряхивают в течение 2...3
мин. После этого смесь оставляют для расслаивания. Когда верхний слой жидкости
станет прозрачным, нижний слой сливают, а верхний используют для
хроматографирования. Подобным образом готовят и другие составы растворителей,
смешивая органические растворители и воду в соответствующих пропорциях.
Хроматографическое разделение. Установка для хроматографирования
представляет собой широкий цилиндр с притертой крышкой. Внутрь цилиндра
помещают малый цилиндр, на который ставят чашку с растворителем (рис. 1).
Нарезают (вдоль волокон) 10...12 полосок хроматографической бумаги
размером 3·45 см. При хроматографировании нижний конец полоски может
свободно свисать либо его вырезают в виде «язычка», который вставляют в
горлышко колбочки-приемника.
На расстоянии 10...15 см от другого конца полоски отмечают точку старта, на
которую наносят определенное количество подготовленного гидролизата. Все
отметки, на бумажной полоске делают только карандашом.
Пробу гидролизата (0,03 мл при массовой доле РВ 1%) наносят
микропипеткой или микрошприцем. Если упаривание гидролизата нежелательно, то
на бумагу наносят несколько раз в одно и то же место (по 0,01 мл) необходимый
объем раствора сахара, который рассчитывают исходя из массовой доли РВ. После
нанесения каждой порции раствора пятно хорошо просушивают (лучше всего
горячим воздухом). Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 5...6 мм.
Полоски устанавливают в строго вертикальном положении. Конец полоски, на
который нанесена проба, загибают в чашку. Пятно пробы должно находиться
снаружи чашки ниже ее края не менее чем на 2 см. Второй конец вставляют в
колбочку-приемник (либо оставляют свисающим). Для лучшей идентификации
сахаров в установку помещают также полоску бумаги с нанесенным раствором
смеси чистых моносахаридов: галактозы, глюкозы, маннозы, арабинозы, ксилозы. В
чашку наливают растворитель и установку герметично закрывают крышкой.
Хроматографирорание проводят при температуре 18...22°С, помещая
установку в специальную комнату или шкаф. Разделение осуществляется за 24...90
ч (в зависимости от качества бумаги и температуры среды). Хроматографирование
считают законченным тогда, когда на проявленной хроматограмме расстояния
между пятнами будут не менее 3 мм.
После окончания разделения сахаров хроматограммы сушат на воздухе (в
вытяжном шкафу) в течение примерно 4 ч до полного удаления растворителя. При
сушке хроматограммы перекидывают через стеклянную палочку, укрепленную на
двух штативах.
Проявление хроматограмм.
Проявителем служит раствор, содержащий 1,66 г
фталевой кислоты и 0,92 мл
свежеперегнанного анилина в 100 мл этанола.
28 рН 5 и снова фильтруют. Кратность упаривания точно определяют и учитывают при расчете масс моносахаридов. Приготовление растворителя. Для приготовления смеси этилацетат пиридин вода (5 : 1 : 5) 150 мл этилацетата и 30 мл пиридина хорошо встряхивают в делительной воронке вместимостью 500 мл, затем прибавляют к смеси 150 мл дистиллированной воды и снова хорошо встряхивают в течение 2...3 мин. После этого смесь оставляют для расслаивания. Когда верхний слой жидкости станет прозрачным, нижний слой сливают, а верхний используют для хроматографирования. Подобным образом готовят и другие составы растворителей, смешивая органические растворители и воду в соответствующих пропорциях. Хроматографическое разделение. Установка для хроматографирования представляет собой широкий цилиндр с притертой крышкой. Внутрь цилиндра помещают малый цилиндр, на который ставят чашку с растворителем (рис. 1). Нарезают (вдоль волокон) 10...12 полосок хроматографической бумаги размером 3·45 см. При хроматографировании нижний конец полоски может свободно свисать либо его вырезают в виде «язычка», который вставляют в горлышко колбочки-приемника. На расстоянии 10...15 см от другого конца полоски отмечают точку старта, на которую наносят определенное количество подготовленного гидролизата. Все отметки, на бумажной полоске делают только карандашом. Пробу гидролизата (0,03 мл при массовой доле РВ 1%) наносят микропипеткой или микрошприцем. Если упаривание гидролизата нежелательно, то на бумагу наносят несколько раз в одно и то же место (по 0,01 мл) необходимый объем раствора сахара, который рассчитывают исходя из массовой доли РВ. После нанесения каждой порции раствора пятно хорошо просушивают (лучше всего горячим воздухом). Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 5...6 мм. Полоски устанавливают в строго вертикальном положении. Конец полоски, на который нанесена проба, загибают в чашку. Пятно пробы должно находиться снаружи чашки ниже ее края не менее чем на 2 см. Второй конец вставляют в колбочку-приемник (либо оставляют свисающим). Для лучшей идентификации сахаров в установку помещают также полоску бумаги с нанесенным раствором смеси чистых моносахаридов: галактозы, глюкозы, маннозы, арабинозы, ксилозы. В чашку наливают растворитель и установку герметично закрывают крышкой. Хроматографирорание проводят при температуре 18...22°С, помещая установку в специальную комнату или шкаф. Разделение осуществляется за 24...90 ч (в зависимости от качества бумаги и температуры среды). Хроматографирование считают законченным тогда, когда на проявленной хроматограмме расстояния между пятнами будут не менее 3 мм. После окончания разделения сахаров хроматограммы сушат на воздухе (в вытяжном шкафу) в течение примерно 4 ч до полного удаления растворителя. При сушке хроматограммы перекидывают через стеклянную палочку, укрепленную на двух штативах. Проявление хроматограмм. Проявителем служит раствор, содержащий 1,66 г фталевой кислоты и 0,92 мл свежеперегнанного анилина в 100 мл этанола.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 26
- 27
- 28
- 29
- 30
- …
- следующая ›
- последняя »