Биохимия. Березовская В.А. - 20 стр.

     Техника бумажной хроматографии состоит в следующем. На
хроматографическую бумагу на место старта наносится капля
исследуемой смеси. Бумага высушивается при комнатной темпе-
ратуре и помещается в закрытый сосуд (хроматографическую ка-
меру), в котором она непрерывно смачивается растворителем.
Растворитель при этом равномерно распределяется по бумаге в
определенном направлении. Вещества, входящие в состав смеси,
вместе с ним перемещаются по бумаге в том же направлении, но
с различной скоростью, и поэтому концентрируются на разном
расстоянии от места старта. Чем меньше растворимость амино-
кислоты в воде и чем больше ее растворимость в феноле или дру-
гом органическом растворителе, тем быстрее она будет двигаться
вместе с ним и тем дальше будет концентрироваться от места
старта. Наоборот, чем больше растворимость аминокислоты в
воде и чем меньше ее растворимость в органическом растворите-
ле, тем медленнее она будет двигаться вместе с ним, концентри-
руяся вблизи от места старта.
     Если разделяемые вещества не окрашены, хроматограмму
«проявляют», т. е. проводят качественные реакции или обнару-
живают их другими методами. Идентификация каждого компо-
нента по окрашенному пятну производится на основании расчета
величины коэффициента распределения (Rf). Коэффициент рас-
пределения вещества равен отношению расстояния Х (в мм),
пройденного веществом от места его нанесения (места старта) до
фронта пятна, к расстоянию Y (в мм), пройденному растворите-
лем от места старта до фронта растворителя:
                                  Х
                           Rf =     ,                        (1)
                                  Y
где Х – расстояние, пройденное веществом от места старта до
фронта пятна, мм;
    Y – расстояние, пройденное растворителем от места старта до
фронта растворителя, мм.
    Коэффициент распределения для каждого соединения инди-
видуален. Он зависит от многих факторов: температуры, состава
растворителя, качества бумаги и т. д. Поэтому Rf является посто-
янной величиной только при данных конкретных условиях. Зная
значение Rf отдельных веществ, можно определить состав смеси,
идентифицировав входящие в нее вещества. Для этого надо про-
                              20