Биохимия. Березовская В.А. - 66 стр.

ется в результате процессов окислительного фосфорилирования в
дыхательной цепи. Ферменты цикла Кребса и ферменты дыха-
тельной цепи локализованы в митохондриях.
    После гибели организма кислород перестает поступать в ор-
ганы и ткани. Распад углеводов при этом продолжается, но про-
исходит он в строго анаэробных условиях. Количество гликогена
в мышцах постепенно уменьшается, а количество молочной ки-
слоты увеличивается.

           4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ
    4.1. Приготовление мышечного экстракта.
    На технических весах взвешивают 10 г мышечной ткани све-
жей рыбы или мяса и помещают в охлажденную, стоящую на
льду ступку. Отмеряют 50 мл охлажденного 0,04 М раствора ни-
котинамида и заливают им взятую навеску. Затем мышцы из-
мельчают ножницами, добавляют кварцевый песок, растирают
в ступке до получения гомогенной массы и экстрагируют
30–40 мин. После этого полученный экстракт переносят в цен-
трифужные пробирки и центрифугируют при 3 000 об/мин
в течение 10 мин. Полученный экстракт используют в качестве
исходного материала для определения гликогена и молочной
кислоты.
    4.2. Определение содержание гликогена в полученном экс-
тракте.
    4.2.1. Приготовление калибровочных растворов.
    Берут пять пробирок. В три из них для построения стандарт-
ной кривой наливают раствор глюкозы: в первую – 50 мкг,
во вторую – 100 мкг и в третью – 200 мкг. В четвертую наливают
0,5 мл полученного экстракта. В оставшуюся пробирку для кон-
троля на реактивы наливают 0,5 мл воды. Во все пробирки при
помощи мерной пипетки добавляют по 5 мл антронового реакти-
ва. Добавление реактива следует проводить быстро, так, чтобы
струя реактива попадала в центр проб. Для этого используют пи-
петку с широким носиком.
    Смеси в пробирках сразу же после добавления реактива
очень быстро и тщательно перемешивают и помещают на
10–15 мин в водяную баню комнатной температуры, а затем пе-
реносят на 15 мин в кипящую водяную баню. При нагревании
                             66