Биохимия. Березовская В.А. - 68 стр.

    Изменение окраски вызвано тем, что молочная кислота в
присутствии фенолята железа (реактив Уффельманна), окрашен-
ного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого
цвета. Химизм реакции следующий:




     фенол               фенолят железа




 фенолят железа   молочная кислота        лактат железа   фенол

     4.4. Количественное определение молочной кислоты.
     4.2.1. Приготовление калибровочных растворов.
     Берут пять пробирок и в три из них для построения стандарт-
ной кривой наливают раствор молочной кислоты: в первую –
5 мкг, во вторую – 10 мкг и в третью – 15 мкг. В четвертую нали-
вают 0,2 мл полученного мышечного экстракта. В пятую пробир-
ку для контроля на реактивы наливают 0,5 мл воды. Во все про-
бирки добавляют по 0,5 мл 20%-ного CuSO4 и дистиллированной
водой доводят объем жидкости в них до 5 мл. Затем добавляют
по 0,5 г гидроксида кальция, тщательно перемешивают и остав-
ляют при комнатной температуре на 30 мин.
     Через 30 мин содержимое всех пробирок центрифугируют.
Из каждой отбирают по 0,5 мл прозрачного центрифугата и пере-
носят его в сухие чистые пробирки, стоящие в ледяной воде. За-
тем медленно, при постоянном встряхивании, добавляют в каж-
дую пробирку по 3 мл 2н H2SO4. После этого пробирки переносят
на 5 мин в кипящую водяную баню, а затем охлаждают до ком-
натной температуры (20ºС) и добавляют по 2 капли (0,05 мл) ще-
лочного раствора параоксидифенила.
     Содержимое пробирок осторожно перемешивают и ставят на
30 мин в термостат или водяную баню с температурой 30ºС,
а затем на 90 сек (!) в кипящую водяную баню, после чего охлаж-
                                     68