Биохимия. Березовская В.А. - 73 стр.

     ПВК       2,4-динитрофенилгидразин   2,4-ДНФ-гидразон
               (2,4-ДНФГ)                 пировиноградной кислоты

    Кроме 2,4-динитрофенилгидразина пировиноградная кислота
взаимодействует в щелочной среде с салициловым альдегидом и
образует вещество, которое имеет оранжевую окраску.

           4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ
    4.1. Приготовление мышечного экстракта.
    Для анализа берут мышцы или какую-нибудь биологическую
жидкость (кровь, моча). При работе с мышцами на технических
весах взвешивают 1 г мышечной ткани свежей рыбы или мяса и
помещают в охлажденную, стоящую на льду ступку. Отмеряют
5 мл охлажденного 0,04 М раствора никотинамида и заливают им
взятую навеску. Затем мышцы измельчают ножницами, добавля-
ют кварцевый песок, растирают в ступке до получения гомоген-
ной массы и экстрагируют 30–40 мин. После этого полученный
экстракт переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют
при 3 000 об/мин в течение 10 мин. Полученный экстракт исполь-
зуют в качестве исходного материала для определения пировино-
градной кислоты.
    4.2. Получение безбелкового фильтрата.
    В микропипетку набирают 1 мл полученного экстракта или
другого биологического раствора (например, крови или мочи),
вносят его в центрифужную пробирку и добавляют 1 мл 5%-ного
раствора трихлоруксусной кислоты. (Осторожно! Это едкое ве-
щество.) При наличии белка раствор мутнеет. Содержимое про-
бирки перемешивают, переносят в центрифужные пробирки и
центрифугируют при 3 000 об/мин в течение 5 мин. Белок при
этом осаждается. Надосадочную жидкость – безбелковый фильт-
рат – используют для определения содержания ПВК. Фильтрат
должен быть прозрачным!
                               73