Биохимия. Березовская В.А. - 74 стр.

     4.3. Приготовление калибровочных растворов.
     Берут восемь пробирок. В шесть из них при помощи микро-
пипетки наливают соответственно по 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 и 1 мл
стандартного раствора пировиноградной кислоты, который со-
держит 50 мкг ПВК в 1 мл. В первые пять пробирок добавляют
соответственно 0,9; 0,8; 0,6; 0,4 и 0,2 мл дистиллированной воды
так, чтобы объем жидкости во всех пробирках стал равным 1 мл.
     В седьмую пробирку наливают 1 мл полученного безбелко-
вого фильтрата. В оставшуюся восьмую пробирку для контроля на
реактивы наливают 1 мл воды. Во все восемь пробирок при помо-
щи мерной пипетки приливают по 1 мл 2,5%-ного спиртового рас-
твора КОН и перемешивают одну минуту. Затем добавляют по
0,5 мл 0,1%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, опять
хорошо перемешивают и оставляют при комнатной температуре
на 15 мин.
    4.4. Определение оптической плотности полученных рас-
творов.
    Полученные растворы колориметрируют на ФЭКе в кювете
толщиной 0,5 см при длине волны 465 нм (синий светофильтр)
против раствора сравнения. Определяют оптические плотности
калибровочных растворов и исследуемого раствора. Полученные
значения оптических плотностей записывают в таблицу.
           Соотношение между содержанием ПВК в растворе
                   и его оптической плотностью

 Количество стандартного раствора
                                     0,1   0,2   0,4   0,6   0,8   1
 ПВК, мл
 Концентрация ПВК, мкг/мл
 Оптическая плотность раствора

    4.5. Построение калибровочного графика и определение со-
держания пировиноградной кислоты.
    Калибровочный график строят, указывая на оси ординат по-
лученную оптическую плотность (среднее арифметическое из
двух параллельных определений), а на оси абсцисс – соответст-
вующее ей содержание пировиноградной кислоты, выраженное в
микрограммах. По графику определяют содержание пировино-
градной кислоты в исследуемом материале.

                                    74