Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 10 стр.

весьма     заметного    растягивания    задних    фронтов     при небольших затратах можно быстро и эффективно
хроматографических пиков (из-за неравновесного распре-        разделять различные смеси.
деления между фазами). Ступенчатая элюция, наоборот,
позволяет получить острые пики с очень хорошим выходом,
но нередко за счет качества разрешения близких по своим
свойствам компонентов, особенно если «высота» ступеней
велика и их расположение не слишком удачно.
   Еще одна особенность хроматографии макромолекул
связана с проблемой доступности всего объема неподвижной
фазы внутри гранул. Ограничение такой доступности
вследствие статистического разброса размеров пор
пространственной     сетки    гранул   используется   для
фракционирования макромолекул по размерам в методе гель-
фильтрации, однако в других вариантах хроматографии огра-
ничение доступности не только уменьшает емкость системы,                                 Рис.1. Пластинка ТСХ.
                                                                            1—фронт растворителя; 2 — пятно целевого вещества; 3
но и существенно затрудняет установление равновесия в                      — стартовая точка; L — расстояние старт—фронту ' —
неподвижной фазе. В этом плане обычные микропористые                           расстояние старт—пятно целевого вещества.
обменники на основе силикагеля, стекла и полистирола
существенно уступают крупнопористым матрицам из
целлюлозы и даже декстрана.                                        Разделение в ТСХ осуществляется вследствие многократного
                                                              пересечения молекулами веществ границы фаз твердая — жидкая
                                                              или жидкая — жидкая, т.е. вследствие многократного
                                                              распределения вещества между подвижной и неподвижной
    2.3. Тонкослойная и бумажная хроматография                фазами (рис. 1). Неподвижной фазой служит либо сухой сорбент
                                                              (адсорбционная хроматография), либо сорбент, покрытый
     Методы тонкослойной и бумажной хроматографии (ТСХ        жидкой фазой (распределительная хроматография). Систему рас-
и БХ) основаны на различии скоростей перемещения              творителей подбирают в соответствии со свойствами разделяемых
компонентов анализируемой смеси в плоском тонком слое         веществ.
сорбента при движении растворителя (элюента). Растворитель         Полярные вещества следует разделять в полярных
перемещается под действием капиллярных или гравитационных     растворителях, малополярные — в менее полярных или
сил. Разница между этими методами заключается лишь в          неполярных       растворителях.  В     различных     системах
способе формирования рабочего слоя. В ТСХ слой сорбента на-   растворителей вещества обладают различной подвижностью.
носят на поддерживающую подложку (пластинку, пленку). В       Количественно подвижность выражается величиной Rf —
БХ роль рабочего слоя играет лист специальной бумаги для      фактором удерживания, равным отношению расстояний от
хроматографии. Преимущество ТСХ заключается в том, что