Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 11 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

стартовой точки до середины пятна вещества (I) и от стартовой
точки до линии фронта растворителя (L). Значение Rf
практически не зависит от длительности проявления, но зависит
от множества других факторов (в том числе и от влажности
воздуха) и, следовательно, представляет собой лишь
предварительную ориентировочную характеристику.
Большинство химических соединений бесцветно, и для их
обнаружения на пластинке используют различные физические
и химические методы. Многие ароматические соединения
имеют собственную флуоресценцию при 360 нм, при такой
длине волны они обнаруживаются в виде желтых
флуоресцирующих пятен на темном фоне. Большинство
готовых ТСХ-пластинок содержит
люминофоры; при облучении ультрафиолетовыми лучами с
длиной волны 254 нм наблюдается равномерное желто-зеленое
свечение. Вещества, поглощающие свет в ультрафиолетовой
области, обнаруживаются в виде темных пятен на светлом фоне.
Сорбенты, применяемые в тонкослойной хроматографии
На ТСХ-пластинках сорбенты закрепляют при помощи
неорганических или органических связующих материалов.
Такой слой держится достаточно прочно, на нем можно даже
делать пометки мягким карандашом. Результаты разделения
хорошо воспроизводятся. Сорбционный слой поглощает летучие
вещества из воздуха, поэтому пластинки нужно хранить
соответствующим образом. Для большинства экспериментов
вполне подходят стандартные пластинки. Пластинки высшего
качества (высокоэффективные ТСХ-пластинки или ВЭТСХ-
пластинки) используют лишь при количественном анализе.
Свойства наиболее важных сорбентов для ТСХ приведены в
таблице 4.
Таблица 4. СОРБЕНТЫ ДЛЯ ТСХ И ИХ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Со
р
бент Область П
р
имечания
Силикагель Разделение
неполярных веществ;
выделение веществ,
обладающих
основными свойствами;
рекомендуется ис-
пользовать элюенты с
основными свойствами
Неполярные вещества
разделяют методом
распределительной
хроматографии
Оксид алюминия Разделение
слабополярных
основных веществ
Поверхность сорбента
сильнополярная
Модифицирован
ный силикагель
Разделение полярных
веществ в условиях
обращенно-фазовой
хроматографии (ОФХ)
Поверхность покрыта
химически
связанными
углеводородными
группами
Полиамид Разделение веществ,
образующих с
амидными группами
сорбента водородные
связи
Элюирующие
свойства
растворителей
возрастают в ряду:
вода< метанол
<ацетон<формамид
<диметилформамид 
стартовой точки до середины пятна вещества (I) и от стартовой
точки до линии фронта растворителя (L). Значение Rf             Таблица 4. СОРБЕНТЫ ДЛЯ ТСХ И ИХ ХАРАКТЕРИСТИКИ
практически не зависит от длительности проявления, но зависит
от множества других факторов (в том числе и от влажности            Сорбент         Область                 Примечания
воздуха) и, следовательно, представляет собой лишь              Силикагель     Разделение              Неполярные вещества
предварительную ориентировочную характеристику.                                неполярных веществ;     разделяют методом
     Большинство химических соединений бесцветно, и для их                     выделение веществ,      распределительной
обнаружения на пластинке используют различные физические                       обладающих              хроматографии
и химические методы. Многие ароматические соединения                           основными свойствами;
имеют собственную флуоресценцию при 360 нм, при такой                          рекомендуется ис-
длине волны они обнаруживаются в виде желтых                                   пользовать элюенты с
флуоресцирующих пятен на темном фоне. Большинство                              основными свойствами
готовых ТСХ-пластинок содержит
                                                                Оксид алюминия Разделение              Поверхность сорбента
люминофоры; при облучении ультрафиолетовыми лучами с
                                                                               слабополярных           сильнополярная
длиной волны 254 нм наблюдается равномерное желто-зеленое
                                                                               основных веществ
свечение. Вещества, поглощающие свет в ультрафиолетовой
области, обнаруживаются в виде темных пятен на светлом фоне.    Модифицирован Разделение полярных      Поверхность покрыта
                                                                ный силикагель веществ в условиях      химически
                                                                               обращенно-фазовой       связанными
  Сорбенты, применяемые в тонкослойной хроматографии
                                                                               хроматографии (ОФХ)     углеводородными
     На ТСХ-пластинках сорбенты закрепляют при помощи                                                  группами
неорганических или органических связующих материалов.
Такой слой держится достаточно прочно, на нем можно даже        Полиамид       Разделение веществ,     Элюирующие
делать пометки мягким карандашом. Результаты разделения                        образующих с            свойства
хорошо воспроизводятся. Сорбционный слой поглощает летучие                     амидными группами       растворителей
вещества из воздуха, поэтому пластинки нужно хранить                           сорбента водородные     возрастают в ряду:
соответствующим образом. Для большинства экспериментов                         связи                   вода< метанол
вполне подходят стандартные пластинки. Пластинки высшего                                               <ацетон<формамид
качества (высокоэффективные ТСХ-пластинки или ВЭТСХ-                                                   <диметилформамид
пластинки) используют лишь при количественном анализе.
Свойства наиболее важных сорбентов для ТСХ приведены в
таблице 4.

Страницы