Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 14 стр.

  Факторы, которые обеспечивают оптимальное разрешение в       колонку; детектор обнаружения веществ в элюате; самописец;
жидкостной хроматографии:                                      автоматизированный коллектор для сбора фракций.
   • небольшие размеры частиц сорбента;                             В качестве соединительных шлангов между отдельными
   • возможно более узкий фракционный состав;                  блоками     хроматографической       системы    используют
   • небольшая скорость подачи элюента;                        тефлоновые капилляры с внешним диаметром 1,6 мм и
   • небольшая вязкость элюента (вследствие чего быстро        внутренним диаметром 0,3—0,5 мм.
      устанавливается диффузионное равновесие);                     В хроматографии при заполнении колонки и подаче в
   • возможно более высокая температура.                       колонку элюента (в том числе при регенерации) используют
                                                               насосы.
                                                                    Перистальтические насосы широко применяются при
         2.5. Жидкостная хроматография низкого давления        биохимических исследованиях, так как в насосах этого типа
     В жидкостной хроматографии низкого давления               исключается контакт элюента с металлом. В устаревших и
компоненты смеси разделяют на хроматографической колонке       дешевых моделях насосов жидкость подается путем
при    нормальном     (гидростатическом)   или     несколько   прокатывания роликов по мягкому шлангу, вследствие чего
повышенном давлении.                                           шланг быстро изнашивается и его приходится заменять.
     Хроматографию на мягких сорбентах, таких как сефадексы,   Определенным достоинством обладают насосы с планетарным
биогели, агарозы и многие полистирольные гели, проводят при    механизмом, где ролики воздействуют на шланг, прижатый к
атмосферном давлении. Этот вид хроматографии применяют для     покрытому     тефлоном     желобу.     Эластичный    шланг
переработки больших объемов жидкости, если не нужно            прижимается роликом к желобу, жидкость в шланге
высокое разрешение, свойственное ВЭЖХ. Во многих случаях       перемещается в направлении движения ролика. Здесь
удовлетворительное разрешение обеспечивается высокой           исключаются принудительное растяжение и последующее
селективностью системы сорбент—элюент. В лабораториях          сокращение шланга, в результате чего механический износ
хроматографию проводят на сорбентах с частицами диаметром      существенно меньше. Работа шланговых насосов ограничена
40—60 мкм, на производстве — диаметром 100—200 мкм и           давлением 200 кПа.
более. При использовании частиц диаметром более 40 мкм              Мембранные насосы обладают достаточной мощностью,
достаточно высокая скорость подачи элюента обеспечивается      они безинерционны, сравнительно дешевы. Корпус насоса
гидростатическим     давлением,    определяемым      высотой   выполнен из нержавеющей стали, поэтому в целом насос
вертикального столба жидкости. Для хроматографии этого типа    долговечен и пригоден для работы с разнообразными
используют более простую аппаратуру, чем для ВЭЖХ, поэтому     растворителями. Если присутствие ионов металлов в растворе
разрешение здесь несколько ниже, а продолжительность           нежелательно, корпус насоса изготавливают из инертных мате-
эксперимента несколько больше.                                 риалов (керамики или тефлона). В насосах этого типа ход
     Хроматографическая система для жидкостной                 поршня и частота перемещения регулируются раздельно.
хроматографии низкого давления включает резервуар или          Следует отметить, что плавность потока (минимальная
градиентный смеситель; насос; устройство ввода пробы;          пульсация) достигается небольшим ходом поршня и высокой