Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 15 стр.

частотой перемещения. В зависимости от особенностей            менее 20 мкм удается только при обработке ультразвуком;
конструкции насосы этого типа создают давление до 3,5 МПа.     работа с более мелкими частицами еще более сложная.
Пульсацию потока также компенсируют при помощи демпфиру-            Применение      мелких    и    однородных      фракций
ющего устройства.                                              целесообразно во многих отношениях. Чем меньше размер
     Колонки. Для эффективности разделения первостепенное      частиц, тем меньше зависимость ВЭТТ от скорости потока
значение имеет конструкция хроматографической колонки.         элюента, поэтому в отличие от классической колоночной
Колонки, снабженные адаптером и краном для ввода пробы,        хроматографии скорость элюирования в ВЭЖХ существенно
более современны, чем стеклянные колонки, имеющие              выше (рис. 3). Кривые на рис. 3 иллюстрируют зависимость
стеклянную пористую перегородку и тефлоновый шланг на          ВЭТТ (Н) от скорости элюирования (U) при элюировании на
выходе. Для изготовления деталей, контактирующих с             сорбентах с частицами различного диаметра. При минимальном
органическими     растворителями,     используют    инертные   размере частиц (3 и 4 на рис.3) увеличение скорости потока
материалы, такие, как стекло, тефлон и нержавеющая сталь.      несущественно влияет на изменение значения Н. Чем частицы
                                                               крупнее, тем заметнее изменение значений ВЭТТ. Высокое
                                                               разрешение и, следовательно, возможность использования
               2.6. Высокоэффективная жидкостная               коротких колонок позволяют ускорить процесс и уменьшить
                         хроматография                         расход растворителей.
     ВЭЖХ — метод разделения веществ на мелкозернистых
сорбентах (с частицами размером менее 15 мкм) при
повышенном давлении. Метод обеспечивает высокую
эффективность и быстроту разделения определяемых веществ.
Вследствие небольших размеров частиц сорбента и их
однородности разделяющая способность ВЭЖХ-колонок
существенно выше по сравнению с хроматографией низкого
давления. Из-за высокого рабочего давления (десятки
атмосфер) приборы для ВЭЖХ отличаются от приборов для
                                                               Рис. 3. Зависимость ВЭТТ (Н) от скорости элюирования (U)
классической колоночной хроматографии.
                                                                 при элюировании на сорбентах с различными размерами
     Чем меньше частицы, тем меньше ВЭТТ и тем выше
                                                                                         частиц.
соответственно достигаемое разделение по всей колонке.
                                                               1 — зипак (37 мкм); 2 — силикагель (10 мкм); 3 — зорбакс (5
Сорбент с частицами диаметром 5±1 мкм обладает более
                                                               мкм); 4 — микросорб (5 мкм).
высокой разделяющей способностью, чем сорбент с более
крупными и менее однородными частицами. Минимальный
размер частиц равен приблизительно 3 мкм, поскольку более          Растворители для ВЭЖХ должны:
мелкие частицы образуют довольно стойкие конгломераты.         - соответствовать стандарту «особо чистые растворители»,
Приготовление стабильных суспензий из частиц диаметром