Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 16 стр.

- иметь минимальную вязкость,                                   широкое применение. Радиоактивационные детекторы
- обеспечивать максимальную селективность разделения;           регистрируют интенсивность β- и γ-излучения радионуклидов.
- не должны содержать взвешенных частиц (фильтрование на
входе колонки на металлическом фильтре с порами диаметром
менее 4 мкм) и комплексообразующих ионов (например,                              2,0                                    50

галогенид- или ацетат-ионы), способствующих коррозии
металлических частей насоса.                                                     1,5
                                                                                                                        40




                                                                                                                             Ацетонитрли (%)
   Хроматографы для ВЭЖХ состоят из                                                                                     30




                                                                      A 210 нм
-насоса, обеспечивающего рабочее давление до 200 • 105 Па;                       1,0

-манометра, рассчитанного на 400 • 105 Па;                                                                              20

-капилляров из нержавеющей стали (внешний диаметр 1,5 мм,                        0,5
внутренний диаметр 0,3 мм);                                                                                             10

- устройства для ввода пробы (автосемплер);
-колонок;                                                                        0,0
                                                                                                                        0
- высокочувствительного детектора.                                                     0   15   30   45          60   мин


      Для всех вариантов ВЭЖХ, за исключением аффинной
хроматографии,      выпускаются      специальные    сорбенты.      Рис. 4. Обращенно-фазовая ВЭЖХ фракции Л4-4
Нерегулярные и сферические сорбенты имеют размер частиц              На рис.4 показано фракционирование препаративной
5—10 мкм.                                                       обращенно-фазовой ВЭЖХ активной фракции Л4-4
      Хроматографические детекторы представляют собой           пептидного биорегулятора, полученного из лимфатических
приборы, позволяющие выявлять целевые вещества в потоке         узлов крупного рогатого скота, условно названного АФЛ.
элюента по характерным свойствам (цвету, флуоресценции,              ВЭЖХ проводили, используя хроматографическую
поглощении в ультрафиолетовой области спектра и др.).           систему System Gold (Beckman, USA), на колонке Luna
      Для определения веществ многих классов применяют          C18(2) (Phenomenex, USA) (2x250 мм), уравновешенную в
спектрофотометрические          и       рефрактометрический     2%-ном растворе ацетонитрила в 0,1% ТФУ. Элюцию
детекторы. Реже применяются детекторы других типов.             веществ с колонки проводили          линейным градиентом
Флюориметрический детектор регистрирует флуоресценцию           ацетонитрил-содержащего 0,08% ТФУ, от указанных
веществ. Разнообразные электрохимические детекторы,             начальных условий до 42% за 80 мин со скоростью 0,2
например, проточные рН-детекторы; ион-селективные               мл/мин. Детекцию осуществляли с помощью детектора на
электроды для обнаружения некоторых видов ионов; проточные      диодной матрице System Gold 168 (Beckman, USA) при длине
детекторы по электропроводности; вольтамперометрические         волны 210 и 280 нм.
детекторы, амперометрические детекторы, находят все более            Анализ второй производной спектра поглощения
                                                                основного пика в диапазоне длин волн от 200 до 300 нм