ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
Праймеры - это короткие, длиной 20-30 оснований,
одноцепочечные ДНК (дезоксиолигонуклеотиды),
комплиментарные 3
'
-концам цепей копируемой ДНК-
матрицы, благодаря которым ограничивается фрагмент ДНК,
который будет миллионы раз скопирован ферментом Taq-
ДНК - полимеразой, присоединяющейся к 3
'
-концам
праймеров и достраивающей их до заданной длины в
несколько сот или тысяч пар оснований. Поскольку праймеры
каждый раз встраиваются в амплифицируемые фрагменты
ДНК- матрицы (ампликоны), то они в реакционной смеси
ПЦР присутствуют в избытке: концентрация их составляет
0,5 - 1,0 мкМ. Специфичность получаемого продукта ПЦР в
значительной степени определяется так называемой
температурой отжига праймеров, при которой они
взаимодействуют с комплиментарными участками ДНК-
матрицы, образуя даухцепочечные структуры. Температура
отжига определяется длиной праймера и содержанием ГЦ-пар
и рассчитывается по следующей формуле:
Т=[(A+T) x 2] + [(Г+С) х 4] - 5Ц (К.Itakura et al).
Праймеры - это короткие, длиной 20-30 оснований, одноцепочечные ДНК (дезоксиолигонуклеотиды), комплиментарные 3'-концам цепей копируемой ДНК- матрицы, благодаря которым ограничивается фрагмент ДНК, который будет миллионы раз скопирован ферментом Taq- ДНК - полимеразой, присоединяющейся к 3'-концам праймеров и достраивающей их до заданной длины в несколько сот или тысяч пар оснований. Поскольку праймеры каждый раз встраиваются в амплифицируемые фрагменты ДНК- матрицы (ампликоны), то они в реакционной смеси ПЦР присутствуют в избытке: концентрация их составляет 0,5 - 1,0 мкМ. Специфичность получаемого продукта ПЦР в значительной степени определяется так называемой температурой отжига праймеров, при которой они взаимодействуют с комплиментарными участками ДНК- матрицы, образуя даухцепочечные структуры. Температура отжига определяется длиной праймера и содержанием ГЦ-пар и рассчитывается по следующей формуле: Т=[(A+T) x 2] + [(Г+С) х 4] - 5Ц (К.Itakura et al).
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 26
- 27
- 28
- 29
- 30
- …
- следующая ›
- последняя »