Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 28 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

Праймеры - это короткие, длиной 20-30 оснований,
одноцепочечные ДНК (дезоксиолигонуклеотиды),
комплиментарные 3
'
-концам цепей копируемой ДНК-
матрицы, благодаря которым ограничивается фрагмент ДНК,
который будет миллионы раз скопирован ферментом Taq-
ДНК - полимеразой, присоединяющейся к 3
'
-концам
праймеров и достраивающей их до заданной длины в
несколько сот или тысяч пар оснований. Поскольку праймеры
каждый раз встраиваются в амплифицируемые фрагменты
ДНК- матрицы (ампликоны), то они в реакционной смеси
ПЦР присутствуют в избытке: концентрация их составляет
0,5 - 1,0 мкМ. Специфичность получаемого продукта ПЦР в
значительной степени определяется так называемой
температурой отжига праймеров, при которой они
взаимодействуют с комплиментарными участками ДНК-
матрицы, образуя даухцепочечные структуры. Температура
отжига определяется длиной праймера и содержанием ГЦ-пар
и рассчитывается по следующей формуле:
Т=[(A+T) x 2] + [(Г+С) х 4] - 5Ц (К.Itakura et al).
      Праймеры - это короткие, длиной 20-30 оснований,
одноцепочечные         ДНК         (дезоксиолигонуклеотиды),
комплиментарные 3'-концам цепей копируемой ДНК-
матрицы, благодаря которым ограничивается фрагмент ДНК,
который будет миллионы раз скопирован ферментом Taq-
ДНК - полимеразой, присоединяющейся к 3'-концам
праймеров и достраивающей их до заданной длины в
несколько сот или тысяч пар оснований. Поскольку праймеры
каждый раз встраиваются в амплифицируемые фрагменты
ДНК- матрицы (ампликоны), то они в реакционной смеси
ПЦР присутствуют в избытке: концентрация их составляет
0,5 - 1,0 мкМ. Специфичность получаемого продукта ПЦР в
значительной степени определяется так называемой
температурой отжига праймеров, при которой они
взаимодействуют с комплиментарными участками ДНК-
матрицы, образуя даухцепочечные структуры. Температура
отжига определяется длиной праймера и содержанием ГЦ-пар
и рассчитывается по следующей формуле:
       Т=[(A+T) x 2] + [(Г+С) х 4] - 5Ц (К.Itakura et al).