Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 17 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

см
3
раствора ОФДА и тщательно перемешивают.
Выдерживают пробирки в темноте 35 мин.
6. ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ
ВИТАМИНА С НА ПРИБОРЕ "ФЛЮОРАТ-02"
Устанавливают в канале возбуждения светофильтр С-1,
а в канале регистрации - светофильтр С-2. Помещают в
кюветное отделение кювету заполненную раствором № I.
Нажимают клавишу "Ф"; Полученное значение Ф заносят в
рабочий журнал. Повторяют операцию измерения с
растворами №№ 2, 3 и 4. Значения сигналов Ф2, Ф3 и Ф4
также заносят в рабочий журнал.
7. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
Концентрация витамина С в анализируемом экстракте
определяется по следующей формуле:
С
ИЗМ
= С
СТ
.(Ф
1
–Ф
3
)/(Ф
2
-Ф
4
),
где С
СТ
- концентрация витамина С в градуировочном
растворе,
С
ИЗМ
- концентрация витамина С в анализируемом экстракте,
мг/см
3
.
Массовую долю витамина С в пробе (X, мг/г) вычисляют по
формуле:
X = С
изм
* V/m
где V - объем экстрагирующего раствора, см
3
;
m - величина навески, г.
4.3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В
1
(ТИАМИНА)
1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Сущность метода основана на кислотном и
ферментаривном гидролизе связанных форм витамина,
окислении тиамина в тиохром и измерении интенсивности
флюорисценции при длинах волн 320 – 390 нм
возбуждающего и 400 – 580 нм излучаемого света.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Весы лабораторные 1 класса точности по ГОСТ 24104-80
рН – метр лабораторный
Термостат с температурой 37
0
С
Анализатор жидкости "Флюорат-02-2М" ТУ 4321-20506233-94
Электрошкаф сушильный с температурой 100
0
С
Баня водяная
Воронки делительные стеклянные
Воронки лабораторные стеклянные
Колбы мерные лабораторные стеклянные вместимостью 100,
250, 1000 см
3
по ГОСТ 1770-74
Бумага индикаторная универсальная
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72
Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206-75, раствор с
массовой долей 1%. Хранят в темной склянке в течение двух
дней.
Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, растворы с молярной
концентрацией (НСl) – 0,1 моль/дм
3
и объемной долей 50%
Кислота уксусная по ГОСТ 61-75, ледяная и раствор с
массовой долей 3%
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, растворы с массовой
долей 10 и 30 %
Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199-78,
насыщенный раствор
Препарат ферментный амилоризин П10Х по ГОСТ 18919-73
Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016-77 (или н-бутиловый,
изоамиловый). Перед использованием измеряют
интенсивность флюоресценции. Пари наличии
флюоресценции спаирт очищают перегонкой.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67 
см3 раствора ОФДА и тщательно               перемешивают.    окислении тиамина в тиохром и измерении интенсивности
Выдерживают пробирки в темноте 35 мин.                       флюорисценции при длинах волн 320 – 390 нм
                                                             возбуждающего и 400 – 580 нм излучаемого света.
       6. ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ                           2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
ВИТАМИНА С НА ПРИБОРЕ "ФЛЮОРАТ-02"                           Весы лабораторные 1 класса точности по ГОСТ 24104-80
       Устанавливают в канале возбуждения светофильтр С-1,   рН – метр лабораторный
а в канале регистрации - светофильтр С-2. Помещают в         Термостат с температурой 370С
кюветное отделение кювету заполненную раствором № I.         Анализатор жидкости "Флюорат-02-2М" ТУ 4321-20506233-94
Нажимают клавишу "Ф"; Полученное значение Ф заносят в        Электрошкаф сушильный с температурой 1000С
рабочий журнал. Повторяют операцию измерения с               Баня водяная
растворами №№ 2, 3 и 4. Значения сигналов Ф2, Ф3 и Ф4        Воронки делительные стеклянные
также заносят в рабочий журнал.                              Воронки лабораторные стеклянные
       7.    ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ                 Колбы мерные лабораторные стеклянные вместимостью 100,
       Концентрация витамина С в анализируемом экстракте     250, 1000 см3 по ГОСТ 1770-74
определяется по следующей формуле:                           Бумага индикаторная универсальная
                                                             Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76
      СИЗМ = ССТ.(Ф1 –Ф3)/(Ф2-Ф4),                           Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72
                                                             Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206-75, раствор с
где ССТ - концентрация витамина С в градуировочном           массовой долей 1%. Хранят в темной склянке в течение двух
растворе,                                                    дней.
СИЗМ - концентрация витамина С в анализируемом экстракте,    Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, растворы с молярной
мг/см3.                                                      концентрацией (НСl) – 0,1 моль/дм3и объемной долей 50%
                                                             Кислота уксусная по ГОСТ 61-75, ледяная и раствор с
Массовую долю витамина С в пробе (X, мг/г) вычисляют по      массовой долей 3%
формуле:                                                     Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, растворы с массовой
               X = Сизм* V/m                                 долей 10 и 30 %
где V - объем экстрагирующего раствора, см3;                 Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199-78,
m - величина навески, г.                                     насыщенный раствор
                                                             Препарат ферментный амилоризин П10Х по ГОСТ 18919-73
                                                             Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016-77 (или н-бутиловый,
         4.3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В1                 изоамиловый). Перед использованием измеряют
                     (ТИАМИНА)                               интенсивность флюоресценции. Пари наличии
      1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА                                     флюоресценции спаирт очищают перегонкой.
      Сущность метода основана на кислотном и                Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67
ферментаривном гидролизе связанных форм витамина,

Страницы