Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 19 стр.

гидролизата пробы. В две другие— по 5,0 см3 стандартного                  V — общин объем гидролизата, см3;
раствора тиамина. Затем в две воронки (с пробой и со                      V1 —объем элюата, взятый для окисления, см3;
стандартным раствором) прибавляют по 1,20 см3                             m — масса навески продукта, г.
окислительной смеси (окисленная форма), в две другие (с                   За окончательный результат анализа принимают
теми же растворами) — по 1,20 см3 раствора гидроокиси              среднее арифметическое значение результатов двух
натрия с массовой долей 30% (неокисленная форма).                  параллельных определении с доверительной вероятностью
Содержимое воронок перемешивают, прибавляют по 10,0 см3            0,95, допускаемое расхождение между которыми не должно
изобутилового спирта и встряхивают в течение 1 мин. Для            превышать: 0,004*10-3 % абс. — при массовой доле витамина
ускорения расслаивания после взбалтывания прибавляют по            В1 нe более 0,050* 10-3%; 0,060*10-3 % абс. — при массовой
0,50 см3 этилового спирта. После расслоения жидкостей              доле витамина B1 более 0,050*10-3%-
нижний водный слой удаляют, а верхний органический слой
сливают     в    кювету         для      измерения интенсивности         4.4 РИБОФЛАВИНОВЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
флуоресценции.         Измеряют           сначала  интенсивность                         ВИТАМИНА В2
флуоресценции стандартных растворов (окисленная и                         1.    СУЩНОСТЬ МЕТОДА
неокисленная форма), затем анализируемых проб.                            Сущность метода основана на кислотном и
       5.     ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ                                ферментативном гидролизе связанных форм витамина,
       Массовую долю витамина В1 (X1) в процентах                  окислении      пигментов      марганцовокислым      калием,
вычисляют по формуле                                               восстановлении рибофлавина гидросульфитом натрия и
             (C − C1 ) ⋅ a ⋅ K ⋅ V ⋅ 100                           измерении интенсивности флуоресценции до и после –
        X1 =                                                       восстановления    при      длинах,   волн    360—480     нм
                ( Д − Д 1 ) ⋅ V1 ⋅ m
                                                                   возбуждающего и 510—650 нм излучаемого света.
       где С—интенсивность флуоресценции окисленном
                                                                          Метод предназначен для анализа слабоокрашенных
формы анализируемого раствора;
                                                                   овощных, фруктовых и ягодных консервированных
       С1 — интенсивность флуоресценции неокисленноп
                                                                   продуктов.
формы анализируемого раствора;
                                                                          2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
       Д — интенсивность флуоресценции окисленной формы
                                                                   Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и
стандартного раствора;
                                                                   реактивы, указанные в п. 2 (метод определения витамина В1)
       Д1 — интенсивность флуоресценции неокисленной
                                                                   со следующими дополнениями:
формы стандартного раствора;
                                                                   Эксикатор вакуумный по ГОСТ 25336—82.
       а—масса тиамина в 5 см3 стандартного раствора, взятая
                                                                   Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336—82,
для окисления, г;
                                                                   вместимостью 50 см3.
       К—.коэффициент пересчета тиамина бромида на
                                                                   Водорода перекись по ГОСТ 10929—76, раствор с массовой
тиамина .хлорид, при использовании для приготовления
                                                                   долей 3 %.
стандартного раствора тиамина хлорида К=1; тиамина
                                                                   Калий марганцовокислый по ГОСТ 20190—75, раствор с
бромида =1,17;