Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 18 стр.

Тиамина хлорид (или тиамина бромид), растворы с массовыми     моль/дм3 и нагревают па кипящей водяной бане в течение 40
концентрациями 0,1; 0,001; 0,0001 г/дм3                       мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и проводят
Фермент пепсин.                                               ферментативный пиролиз.
       3.ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ                                        При анализе фруктовых и ягодных консервов с
3.1. Приготовление стандартного раствора тиамина              большим содержанием пектиновых веществ (из яблок,
Раствор готовят из тиамина следующим образом: тиамин          крыжовника, черной смородины и др.) используют
предварительно высушивают в течение 2 ч в сушильном           ферментный препарат амнлоризин П10Х и пектаваморин
шкафу при1000С. Раствор с массовом концентрацией 0,1 г/дм3    П10Х.
хранят и темной склянке в холодильнике в течение месяца.             В остальных случаях используют только амилоризин
Растворы с массовыми концентрациями 0,01 и 0,0001 г/л         П10Х.
готовят в день проведения анализов.                                  Предварительно устанавливают величину рН 4,2—4,5.
       Для приготовления раствора с массовой концентрацией    Для этого содержимое колбы помещают в стакан
0,1 г/дм3растворяют 0,100 г тиамина в дистиллированной воде   вместимостью 200 см3, прибавляют при постоянном
в мерной колбе вместимостью 1000 см3, прибавляют 10 капель    перемешивании раствор уксуснокислого натрия до нужной
концентрированной соляной кислоты, доводят до метки водой     величины рН. Измерение величины рН производят рН-
и перемешивают.                                               метром, после этого содержимое стакана переносят в ту же
        Для приготовления раствора тиамина с массовой         колбу вместимостью 250 см3. Затем прибавляют 0,10 г
концентрацией 0,001 г/дм3 1,0 см3 раствора с концентрацией    амилоризина П10Х, или по 0,10 г амнлоризина П10Х и
0,1 г/дм3 отбирают и мерную колбу вместимостью 100 см3,       пектаваморина П10Х перемешивают, закрывают пробкой и
доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.       выдерживают в термостате при 37°С в течение 12 — 16 ч.
       Для приготовления раствора тиамина с массовой          Гидролизат охлаждают до комнатной температуры, доводят
концентрацией 0,0001 г/дм3 10,0 см3 раствора с                до метки дистиллированной водой, перемешивают и
концентрацией 0,001 г/дм3 отбирают в мерную колбу             фильтруют.
вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной              Овощные консервы с мясом обрабатывают ферментами
водой и перемешивают.                                         пепсин и амилоризином П10Х. Для этого в колбу помещают
       3.2. Приготовление окислительной смеси.                0,10 г пепсина и выдерживают в термостате при 37°С в
Окислительную смесь готовят смешиванием 2,0 см3 раствора      течение 4 ч. Затем устанавливают величину рН 4,2—4,5,
железосинеродистого калия с 10,0 см3 раствора гидроокиси      прибавляют 0,10 г амнлоризина П10Х, перемешивают и снова
натрия с массовой долей 30%.                                  выдерживают в термостате при той же температуревb течение
       3.3. Приготовление гидролизата                         12—16 ч. После этого гндролизат охлаждают, доводят до
       Навеску пробы массой 50,0 г — для консервированного    метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют.
продукта без добавления витаминов, 20,0 г — с добавлением            4.    ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
витаминов переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3,             4.1. Окисление тиамина в тиохром
прибавляют 150 см3 раствора соляной кислоты с (НСl) =0,1             В две делительные воронки помещают по 5,0 см3