Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 20 стр.

массовой долей 3 %- Срок хранения семь дней.                   мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 150 см3
Кислота серная по ГОСТ 4204—77, раствор с массовой долей       раствора соляной кислоты с (НСl) = 0,1 моль/дм3,
93,6-95,0 %.                                                   устанавливают с помощью раствора уксуснокислого натрия
Натрия гидросульфит технический по ГОСТ 246—76.                величину рН 4,2—4,5. Прибавляют 0,10 г "амнлоризина П10Х
 Рибофлавин, растворы с массовыми концентрациями 0,02 и        или по 0,10 г амилоризина П10Х и пектаваморина П10Х и
0,001 г/дм3.                                                   выдерживают в термостате при 37°С в течение 12— 16 ч.
       3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ                                       Контрольный опыт проводят одни раз для каждой
       3.1. Приготовление, стандартного раствора               партии ферментов.
рибофлавина                                                          4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
       Раствор готовят из рибофлавина следующим образом:             4.1. В две колбы вместимостью 50 см3 каждая
предварительно высушивают рибофлавин в вакуум-                 помешают по 10,0 см3 гидролизата пробы, в третью колбу —
эксикаторе над концентрированной серной кислотой. Раствор      10,0 см3 гпдролизата контрольного опыта. В одну колбу с
с концентрацией 0,02 г/дм3 хранят в холодильнике в течение     анализируемым       гпдролизатом              прибавляют  1,0   см3
месяца. Раствор с концентрацией 0,001 г/дм3 готовят и день     стандартного раствора рибофлавина с массовой долей
проведения анализа.                                            концентрацией 0,001 г/дм3, в две другие — по 1,0 см3
       Для      приготовления      стандартного     раствора   дистиллированной воды. Во все колбы прибавляют по 1,0 см3
                                                  3
рибофлавина с массовой концентрацией 0,02 г/дм в мерную        ледяной     уксусной        кислоты,            0,50  см3  раствора
колбу вместимостью 1000 см3 помешают 0,020 г рибофлавина,      марганцовокислого калия, перемешивают и выдерживают 2
прибавляют около 750 см3 дистиллированной воды, 1,0 см3        мин. Затем прибавляют по 0,50 см3 раствора перекиси
ледяной уксусной кислоты и слегка нагревают при                водорода и снова перемешивают. Через 5 мин измеряют
перемешивании до растворения. Затем раствор охлаждают до       интенсивность флуоресценции сначала раствора с добавкой
комнатной температуры, доводят до метки дистиллированной       рибофлавина, затем раствора без добавки и контрольного
водой и снова перемешивают.                                    опыта. Измерение интенсивности флуоресценции каждого
       Для приготовления раствора рибофлавина с массовой       раствора производят сначала без прибавления гидросульфита
концентрацией 0,001 г/дм3 отбирают 5,0 см3 раствора с          натрия, затем после его прибавления. Гидросульфит •натрия
массовой концентрацией 0,02 г/дм3 в мерную колбу               прибавляют порциями по 0,02—0,05 г, быстро перемешивают
вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной        и снова производят измерение. Эту операцию повторяют до
водой и перемешивают.                                          установления наименьшей интенсивности флуоресценции.
       3.2. Приготовление гидролизата                                5.     ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
       Приготовление     гидролизата     проводят    по    п         Массовую долю витамина В2 (Х2) в процентах,
3,3.(определение витамина В1), с дополнением, указанным        вычисляют по формуле:
ниже.                                                                      [( A − A1 ) − (C − C1 )] ⋅ b ⋅ V ⋅ 100
       Для определения поправки на содержание витамина В2             X2 =                                        ;
                                                                             [( Д − Д1 ) − ( А − А1 )] ⋅ V1 ⋅ m
в ферментах одновременно проводят контрольный опыт. В
                                                                     где А — интенсивность флуоресценции раствора