Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 30 стр.

       наконечники автоматической пипетки необходимо            температурой должен осуществляться в режиме
       использовать однократно! Все используемые пробирки       Tube или Sim):
       пометить цифровым или буквенным обозначением,               94°С 3 мин;
       расшифровка которых должна быть точно приведена в           35 циклов, включающих 94°С 45 сек,
       журнале.                                                                      72°С 1 мин 10 сек;
4.2.   В одну из пробирок “ПЦР ядро” с ПЦР смесью                  72°С 4 мин.
       чистым наконечником внести 5 мкл буфера ТЕ
       (отрицательный контроль, К-).                         7. Извлечь пробирки из амплификатора, поместить в
                                                                штатив и перенести в комнату для детекции
4.3.   В последнюю очередь (!!!), еще в одну пробиру с ПЦР      продуктов ПЦР.
       смесью чистым наконечником внести 5 мкл
       Положительного контроля (К+).
                                                                        3. Детекция продуктов ПЦР
4.4.  Содержимое всех пробирок аккуратно перемешать
      (достаточно  несколько    раз    пипетировать   их     1. Приготовление рабочего раствора буфера для
      содержимое при внесении раствора ДНК)                     электрофореза. Содержимое пакета с надписью
NB! При добавлении растворов ДНК, положительного и              «Буфер для электрофореза» растворить в 200-300
   отрицательного         контролей        настоятельно         мл дистиллированной воды, добавить       10 мкл
   рекомендуется    пользоваться     наконечниками      с       Бромистого этидия и довести объем полученного
   противоаэрозольными           фильтрами          для         раствора до 1 л дистиллированной водой. Готовый
   предотвращения перекрестной контаминации проб и              раствор Буфера для электрофореза хранится до 1
   загрязнения их положительным контролем. По этой              года при +4˚С или 3 месяца при комнатной
   же причине хранить положительный контроль, пробы             температуре.
   ДНК и праймеры рекомендуется отдельно друг от друга.
                                                             2. Подготовить к работе прибор для горизонтального
5. Во все используемые пробирки добавить по 20-25 мкл            электрофореза в соответствии с прилагаемым к
   минерального масла и центрифугировать пробирки 5-7 сек        нему техническим описанием:
   при 2 тыс. об./мин. При этом отдельные капли ПЦР смеси,   2.1. Разместить прибор на столе, с помощью
   оказавшиеся при ее перемешивании на стенках и крышке          регулируемых по высоте ножек прибора и
   пробирки, должны быть сброшены на дно. Сверху должно          ориентируясь по уровням, установить прибор в
   быть наслоено минеральное масло.                              фиксированное, строго горизонтальное положение.
                                                             2.2. Собрать столик для заливки геля. В плашку
6. Пробирки с ПЦР смесью поместить в амплификатор и              установить 1-2-3 гребенки в зависимости от
   запустить программу амплификации (контроль за                 количества анализируемых проб так, чтобы