Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 31 стр.

   расстояние между зубцами соседних гребенок и одним из         последовательности (порядок нанесения проб
   краев плашки составляло не меньше 2 см.                       фиксируется в журнале), и в последнюю очередь, -
                                                                 содержимое пробирки с положительным контролем.
3. Приготовление агарозного геля.
3.1.Содержимое одного из пакетов с надписью «Агароза»         7. Закрыть крышку прибора для электрофореза и
    перенести в стеклянную колбу объемом не менее, чем 200       подключить его к источнику постоянного
    мл, прибавить 150 мл готового раствора Буфера для            напряжения,   строго   соблюдая    полярность
    электрофореза.                                               электродов, и помня, что электрофорез идет в
3.2.Суспензию агарозы в колбе довести до кипения на              направлении от катода к аноду (от «минуса» к
    электроплитке или в микроволновой печи и, периодически       «плюсу»).
    помешивая, продолжать нагревать до совершенно
    прозрачного состояния (обычно 1-2 мин).                   8. Включить электропитание и установить рабочее
3.3.Расплав охладить при комнатной температуре до 55-60˚С,       напряжение равным 100 В. В таком режиме
    а затем налить в плашку для геля от прибора для              электрофорез будет продолжаться приблизительно
    электрофореза, не допуская образования воздушных             30-40 мин, при этом «краска» (красящий компонент
    пузырьков, так, чтобы толщина слоя расплава была не          ПЦР смеси синего цвета) должна «пробежать» в
    менее 4 мм, а зубцы гребенок были погружены в него не        геле около 1 см.
    менее, чем на 2 мм. Дать агарозе полностью застыть,
    обычно для этого требуется 15-20 мин.                     9. По окончании электрофореза отключить источник
4. Извлечь гребенки из агарозного геля (осторожно, легким и      напряжения, снять крышку с прибора для
    плавным движением вверх, стараясь не повредить               электрофореза. Агарозный гель извлечь из плашки
    образовавшиеся карманы). Разобрать столик для заливки и      и поместить в «кабинет» видеосистемы на фильтр
    плашку с готовым агарозным гелем перенести в                 трансиллюминатора.    Произвести    регистрацию
    электрофорезную камеру прибора.                              полученных результатов в памяти компьютера.
                                                              NB! Избегайте контакта геля и буфера с кожей.
5. Залить в камеру готовый раствор Буфера для                     Используйте резиновые перчатки
   электрофореза так, чтобы жидкость покрывала гелевую
   пластину слоем 2-3 мм.                                             4. Анализ полученных результатов

6. По окончании ПЦР 15 мкл окрашенной ПЦР смеси                    В продуктах амплификации ДНК положительного
   отобрать из-под слоя минерального масла и осторожно        контроля должна присутствовать одна яркая и четкая
   перенести в карман гелевой пластины. Рекомендуется в       полоса.    Размер   ПЦР-продукта      (специфический
   первую очередь наносить на электрофорез содержимое         фрагмент),     формирующего     эту      полосу   на
   пробирки с отрицательным контролем, затем –                электрофореграмме, составляет 160 п.н.
   исследуемые пробы в любой, но строго фиксированной