Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 33 стр.

  2. МЕТОДИКА УСКОРЕННОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ                      искомой ДНК-мишени в исследуемом материале судят
     ТКАНЕЙ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В                       по специфическому ПЦР-фрагменту, который легко
 СОСТАВЕ МЯСНОГО СЫРЬЯ, ПОЛУФАБРИКАТОВ,                     идентифицировать на электрофореграмме благодаря
      ГОТОВЫХ МЯСНЫХ ИЗДЕЛИЙ И КОРМОВ                       положительному контролю, входящему во все наборы
  МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ                       реагентов для ПЦР.
                                                               Методика идентификации тканей животного
                                                            происхождения оптимизированы для исследования
     Методика определения видовой принадлежности тканей     пищевого и кормового сырья, полуфабрикатов,
 крупного рогатого скота, свиней и кур основана на ПЦР-     продуктов                питания               и
 детекции фрагментов ДНК, специфичных для указанных         кормов животного и смешанного происхождения.
 видов животных, с последующей детекцией продуктов               Количество образца исследуемого материала,
 реакции методом электрофореза.                             необходимое для проведения одного анализа,
     Для идентификации тканей крупного рогатого скота,      составляет меньше 0,1 мг (100-150 мкл). Объем
 свиней и кур методом ПЦР предлагаются наборы реагентов     экстракта ДНК, полученного в ходе пробоподготовки
 "BOV-ПЦР ядро", "SUS-ПЦР ядро" и "GUL-ПЦР ядpo",           из одного образца исследуемого материала (75 мкл),
 соответственно, основой и особенностью которых             позволяет при необходимости повторять проведение
 является готовая к потреблению лиофильно высушенная        ПЦР с его использованием до 15 раз.
 смесь всех необходимых для ПЦР компонентов (включая
 видоспецифичные        праймеры),     находящаяся      в
 микропробирках объемом 0,5 или 0,2 мл. В состав набора
 входят: универсальный жидкий реагент - ПЦР-
                                                                ЭТАП I. ПОДГОТОВКА ПРОБ (ВЫДЕЛЕНИЕ
 растворитель, который добавляют в пробирки с сухой
                                                                ДНК)
 смесью для ПЦР непосредственнo перед употреблением, а
 также - отдельные пробирки для отрицательного и для        Реактивы
 положительного контролей!                                  Набор реагентов для пробоподготовки SILICA M
     Пробоподготовка,     т.е.   выделение     ДНК     из   (хранить при температуре +4°С):
 анализируемого материала, производится с помощью набора    Буфер ЛБ, готов к применению - 1 флакон, 60 мл
 реагентов серии SILICA, который позволяет выделять ДНК      Буфер ОБ 1, концентрат- 1 флакон, 13,5 мл
 практически из всего разнообразия пищевых продуктов,        Буфер ОБ 2, концентрат- 2 флакона по 13,5 мл
 полуфабрикатов и кормов. Получаемые препараты ДНК           Буфер ТЕ, готов к применению - 2 флакона по 4 мл
 можно сразу использовать для ПЦР без определения           Сорбент, готов к применению - 2 пробирки по 2 мл
 концентрации ДНК в них и дополнительного разбавления.
    Детекция продуктов ПЦР производится с помощью            Исходные материалы
набора реагентов, предназначенного для проведения            Наконечники для автоматических дозаторов до 200
электрофореза в пластинах агарозного геля. О присутствии     мкл и до 1000 мкл в штативах