Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 34 стр.

 Микропобирки 1,5 мл с крышкой                               кристаллизации буфера ЛБ, в этом случае перед
 Вода дистиллированная                                       использованием его необходимо немного подогреть и
 Спирт этиловый 96%-ный, ректификат                          перемешать до полного растворения осадка.
 Дезрастворы                                                      3. Инкубировать пробу в термостате 40 мин при
                                                                  65°С.
                                                                  4. Встряхнуть содержимое пробирки на вортексе.
    Протокол   проведения    пробоподготовки            с
    помощью набора реагентов SILICA M                        NВ! В случае, когда содержимое пробирки полностью
                                                             затвердело во время инкубации термостате, в эту же
                                                             пробирку необходимо добавить еще 200-300 мкл
   1. Приготовление рабочих буферных растворов ОБ. К         буфера ЛБ и тщательно встряхнуть на вортексе.
содержимому флакона с концентратами буферов ОБ 1 и ОБ 2           5. Центрифугировать 10 мин при 10 тыс. об/мин.
прибавить по 40 мл 96%-ного этилового спирта и перемешать    Надосадочную                 жидкость,              не
путем переворачивания плотно закрытого флакона 5-6 раз.      задевая осадка, полностью отобрать с помощью
   Внести исследуемую пробу в пробирку с помощью             автоматического        дозатора     и       перенести
   одноразового шпателя:                                     в чистую пробирку, меняя наконечники при переходе
   а) жидкие и полужидкие материалы (пюре, соусы и пр.)-     от пробы к пробе.
   100-150 мкл;                                                   6. Добавить в пробирку с надосадочной
   б) сухие сыпучие материалы (мясная, рыбная,               жидкостью       40    мкл     суспензии     сорбента
мясокостная, костная мука и пр.) -100-150 мкл по насыпному   (перед использованием сорбента, его следует
объему (5-7 мм от дна пробирки);                             полностью        суспендировать      на      вортексе
   в) мягкие материалы, легко поддающиеся измельчению        до исчезновения осадка).
(мясо и мясные полуфабрикаты, фарш, колбаса, консервы и           7. Содержимое пробирки с пробой встряхнуть на
пр.), необходимо измельчить с помощью скальпеля,             вортексе до полной гомогенизации и оставить в
ножниц и одноразового шпателя, гомогенизировать              штативе на 5-7 мин., периодически переворачивая
фарфоровым пестиком фарфоровой ступке, тщательно             плотно
перемешивая содержимое, а затем отобрать приблизительно      закрытую пробирку вручную;
100-150 мкл по объему.                                            8. Пробирки центрифугировать 10 сек при 10 тыс.
   Для предотвращения перекрестной контаминации              об./мин.
инструменты для измельчения материала используются                9. Надосадочную жидкость удалить при помощи
однократно и тщательно моются после использования или        автоматической               пипетки              или
при переходе от пробы к пробе.                               насоса с колбой-ловушкой, не задевая при этом осадка.
     2. Добавить в пробирку 400 мкл буфера ЛБ.                     10. К осадку прибавить 500 мкл буфера ОБ 1,
Гомогенизировать пробу с помощью гомогенизатора              содержимое пробирки встряхивать на вортексе до
Поттера до однородного состояния.                            полного суспендирования осадка.
      NB! Долгое хранение при +4°С может привести к                11. Центрифугировать пробы 20 сек. при 2 тыс.