Картирование генома и обратная генетика. Буторина А.К - 57 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

57
ется гетеродуплексный анализ (HA), который позволяет выявлять мутации,
находящиеся в гетерозиготном состоянии, а также инсерции и делеции.
Принцип этого метода заключается в следующем. При амплификации
фрагментов генов гетерозигот, последующей денатурации и медленной ре-
натурации полученных продуктов ПЦР в амплифицированной смеси наря-
ду с двумя типами гетеродуплесов образуются гетеродуплексы между
нормальной и мутантной цепями ДНК. Такие гетеродуплексные молекулы
отличаются по электрофоретической подвижности от гомодуплексов за
счет конформационных особенностей в местах несовпадения нуклеотидов,
поскольку электрофоретическая подвижность гетеродуплексов значитель-
но ниже , чем гомодуплесов. Эти различия обнаруживаются при электро-
форезе в ПААГ. Данный метод также позволяет находить до 80% мутаций .
Рисунок 17. Анализ конформационного полиморфизма одноцепо-
чечной ДНК (SSCP) [Глик, 2002]:
Препараты ДНК, различающиеся одной парой нуклеотидов (A:T↔G:C),
амплифицируют ПЦР-методом с использованием одинаковых праймеров (П 1,
П 2). ПЦР-продукты денатурируют и разделяют с помощью гель-электрофореза
на двух дорожках (1 и 2). Расстояние, на которое перемещаются одноцепочеч-
ные молекулы ДНК, зависит от конформации, а посдняя, в свою очередь, - от
нуклеотидной последовательности. ПЦР-продукты образуют в геле не две, а че -
тыре полосы . 
                                    57
ется гетеродуплексный анализ (HA), который позволяет выявлять мутации,
находящиеся в гетерозиготном состоянии, а также инсерции и делеции.
Принцип этого метода заключается в следующем. При амплификации
фрагментов генов гетерозигот, последующей денатурации и медленной ре-
натурации полученных продуктов ПЦР в амплифицированной смеси наря-
ду с двумя типами гетеродуплесов образуются гетеродуплексы между
нормальной и мутантной цепями ДНК. Такие гетеродуплексные молекулы
отличаются по электрофоретической подвижности от гомодуплексов за
счет конформационных особенностей в местах несовпадения нуклеотидов,
поскольку электрофоретическая подвижность гетеродуплексов значитель-
но ниже, чем гомодуплесов. Эти различия обнаруживаются при электро-
форезе в ПААГ. Данный метод также позволяет находить до 80% мутаций.




     Рисунок 17. Анализ конформационного полиморфизма одноцепо-
чечной ДНК (SSCP) [Глик, 2002]:

      Препараты ДНК, различающиеся одной парой нуклеотидов (A:T↔ G:C),
амплифицируют ПЦР-методом с использованием одинаковых праймеров (П1,
П2). ПЦР-продукты денатурируют и разделяют с помощью гель-электрофореза
на двух дорожках (1 и 2). Расстояние, на которое перемещаются одноцепочеч-
ные молекулы ДНК, зависит от конформации, а посдняя, в свою очередь, - от
нуклеотидной последовательности. ПЦР-продукты образуют в геле не две, а че-
тыре полосы.

Страницы