Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 27 стр.

зидина в колбу добавляют 5,45 г уксуснокислого натрия, охлаждают и до-
водят водой до метки).
    3. 0,3%-ная перекись водорода.
    4. Фотоэлектроколориметр.
                               Ход анализа
    Навеску растительного материала массой 200-500 мг тонко растирают в
фарфоровой ступке с водой или ацетатным буфером с рН 5,4 и переносят в
мерную колбу на 50 см3. После 10 минут настаивания вытяжку центрифу-
гируют при 4000 об/мин. Для измерения активности лучше брать такое
разведение вытяжки, чтобы изменение окраски происходило за 20-60 с. В
две кварцевые кюветы с рабочей длиной 20 мм приливают по 2 см3 фер-
ментной вытяжки или центрифугата, 2 см3 буферного раствора и 2 см3 бен-
зидина. Кюветы в фотоэлектроколориметре располагают против свето-
фильтров. Измерение проводят с использованием красного светофильтра
при 590 нм в следующей последовательности. В начале с помощью левого
барабана устанавливают стрелку гальванометра на нуль, затем правым ба-
рабаном переводят стрелку гальванометра в крайнее левое положение (D =
0,125 или 0,250). После этого в контрольную правую кювету приливают
2 см3 воды, а в левую опытную (измерительную) - 2 см3 0,3%-ной переки-
си водорода из пипетки с широким отверстием. С внесением первой капли
перекиси водорода включают секундомер. Стрелка гальванометра начина-
ет отклоняться от края шкалы к нулевому делению. Секундомер останав-
ливают, когда стрелка гальванометра достигает нулевого деления.
    По найденной скорости реакции вычисляют активность А фермента :
                                    Daбв
                                A=        ,
                                      сt
где D - оптическая плотность, равная 0,125 или 0,250;
    а - отношение количества жидкости, взятой для приготовления вы-
тяжки, к массе сырой ткани, см3/г;
    б - степень дополнительного разведения вытяжки после центрифуги-
рования;
    в - степень постоянного разведения вытяжки в реакционной смеси в
кювете;
    с - толщина слоя (2 см);
    t - время, с.
                               Литература
    1. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Ярош Н.П., Перуанский Ю.В., Луковнико-
ва Г.А., Иконникова М.И. Методы биохимического исследования растений. Л.:
Агропромиздат, 1987. С.41-43.


26