Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 29 стр.

    В опытную кювету вносят 1,5 см3 ферментной вытяжки (центрифуга-
та) или взвеси митохондрий и добавляют 1,5 см3 восстановленного цито-
хрома с. Первое измерение оптической плотности после приливания вос-
становленного цитохрома с производят через 30 с, а зазатем через 1-2 мин
в течение 5-10 мин или другого интервала времени в зависимости от ак-
тивности фермента. Между отсчетами проверяют настройку прибора по
контрольной кювете. При окислении цитохрома с цитохромоксидазой оп-
тическая плотность раствора падает. По истечении времени опыта для
полного окисления оставшегося неокисленным цитохрома с в кювету до-
бавляют 1-2 кристаллика феррицианида калия K3[Fe(CN)6], встряхивают и
вновь измеряют плотность раствора при 550 нм. Расчет активности фер-
мента производят по формуле:
                         lg(D1 − D 3 ) − lg(D 2 − D 3 )
                      А=                                ,
                                   t 2 − t1
где А - активность цитохромоксидазы, выраженная в условных единицах;
    D1 - оптическая плотность исследуемого раствора в начале опыта (пер-
вое измерение);
    D2 - оптическая плотность раствора в конце опыта;
    D3 - оптическая плотность раствора после окисления цитохрома крас-
ной кровяной солью;
    t - время (t1 - от начала опыта, t2 - конечное), мин.
    Результаты выражают на единицу сырой массы или на единицу белка.
                                 Литература
    1. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Ярош Н.П., Перуанский Ю.В., Луковнико-
ва Г.А., Иконникова М.И. Методы биохимического исследования растений.-Л.:
Агропромиздат, 1987. С.45-47.
    2. Smith L.// Meth. Biochem. 1955. Vol.2. P. 427-435.

      ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПОЛИФЕНОЛОКСИДАЗЫ
    Полифенолоксидаза, или о-дифенолоксидаза, или тирозиназа, играет
важнейшую роль в дыхании растений, катализируя реакцию окисления
полифенолов. Система «полифенол ↔ хинон» является промежуточным
звеном при окислении органических соединений в процессе дыхания рас-
тений. Этот фермент катализирует окисление в присутствии молекулярно-
го кислорода не только разнообразных полифенолов, но и монофенолов (в
частности, тирозина), о-дифенолов с образованием соответствующих хи-
нонов. Установлено, что в зависимости от того, из какого источника полу-
чена полифенолоксидаза, способность ее к окислению о-дифенолов, поли-
фенолов и монофенолов различна.

28