Морфология и культивирование микроорганизмов. Чурикова В.В - 40 стр.

                                   40
    Учет бактерий по методу    С.Н.Виноградского в модификации
                        О.Г.Шульгиной

     Порядок работы. Готовят почвенную болтушку в разведении 1:10,
для чего 5 г почвы высыпают в колбу с 45 мл стерильной воды. Хорошо
взбалтывают содержимое в течение 5 мин. и дают отстояться 2-3 мин.
Затем с помощью стерильной пипетки берут 0,01 мл взвеси и
распределяют каплю равномерно на предметном стекле на площади 4 см2
препаровальной иглой. Площадь определяется по трафарету. После
просушивания препарат фиксируют спиртом 20 мин. и затем окрашивают
карболовым эритрозином 30 мин. Эритрозин хорошо окрашивает бактерии
и не окрашивает частицы почвы. Через 30 мин. краситель сливают,
препарат просушивают и рассматривают с иммерсионной системой
микроскопа. Подсчитывают количество бактериальных клеток в 5 полях
зрения микроскопа (при проведении исследований в 50 полях зрения) и
берут среднее. Далее рассчитывают количество микроорганизмов в 1 г
почвы по формуле:
                            А . S мм2 . 50 мл
                     А = ------------------------------, где
                          S 1 . мм2 . 0,01 мл . 5 г
А – количество бактерий в 1 г почвы,
а – среднее количество микроорганизмов в поле зрения микроскопа,
S – площадь мазка (400 мм2), S1 – площадь поля зрения микроскопа,
0,01 мл – объем капли суспензии, взятой для мазка, 50 мл – общий объем
суспензии, 5 г – навеска почвы. Площадь поля зрения микроскопа
определяют с помощью объект-микрометра. При пересчете необходимо
учитывать влажность исследуемого образца почвы.

      Учет микроорганизмов на плотных питательных средах

     При использовании метода агаровых пластинок для количественного
учета микробов 1 г почвы разводят стерильной водой в 10000-100000 раз
для удобства подсчета развившихся колоний.
     Порядок работы: Приготовление почвенной болтушки при
разведении 1:10000. Взвесив на часовом стекле 1 г почвы на технических
весах, вносят ее в колбу с 99 мл стерильной воды и взбалтывают в течение
3-5 минут, не смачивая ватной пробки. После отстаивания в течение 2 мин.
стерильной пипеткой берут 1 мл почвенной болтушки и переносят в
пробирку с 9 мл стерильной воды (пробирка N 1), также перемешивают 1
мин., дают отстояться 30 сек., после чего из пробирки N 1 берут 1 мл
почвенной болтушки и переносят в пробирку N 2 с 9 мл стерильной воды
и т.д.